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本研究分别将埃博拉病毒(EBOV)和马尔堡病毒(MARV)核蛋白(NP)基因(enp、mnp)克隆入原核载体pET-32a(+)中，同时将链球菌抗生物素标签(sbp)引入mnp3’端并克隆到原核载体pET-20b(+)中。经酶切鉴定和序列测定，重组质粒pET-32a(+)-enp、pET-32a(+)-mnp和pET-20b(+)-ms构建成功，然后将重组质粒分别转化到大肠杆菌BL21(DE3)qb进行表达。SDS-PAGE分析显示，表达的重组蛋白EBOV-NP-Trx-His(ETH)、MARV-NP-Trx-His(MTH)和MARV-NP-SBP(MS)分子量分别为116kDa、108kDa、98kDa。经Westernblot分析表明，抗His标签单抗与重组蛋白ETH和MTH上的His标签均能发生特异性反应，抗MARV-NP(MNP)单抗可与MTH和MS发生特异性反应，说明重组蛋白ETH、MTH和MS都成功表达，且MTH和MS与抗MNP单抗具有良好的免疫反应性。
分别以重组ETH和MTH为抗原免疫BALB/c小鼠，3次加强免疫后经细胞融合、间接ELISA法双筛选和3次有限稀释法连续克隆后，最终获得3株抗ENP的特异性杂交瘤细胞(3G8、4B4、4C12)和3株针对MNP的杂交瘤细胞(1H4、2G1、3B5)。除单抗3G8的亚类为IgG2aK外，其它的皆为IgGD1κ。3G8、4B4、4C12、1H4、2G1、3B5细胞培养液上清和腹水的ELISA效价分别为1:2.560×103、1:2.560×103、1:2.560×103、1:6.400×103、1:6.400×103、1:1.280×104和1:1.638×107、1:8.192×106、1:8.192×106、1:1.024×106、1:4.096×106、1:8.192×106。Westernblot分析表明，抗ENP的3株单抗与MTH无交叉反应性，抗MNP的3株单抗则与ETH无交叉反应性，且6株单抗与His标签和Trx标签都无反应，说明这6株单抗均具有良好的特异性。经辛酸-硫酸铵法纯化后，获得的单抗3G8、4B4、4C12、1H4、2G1、3B5的浓度分别为4.584mg/mL、4.822mg/mL、10.000mg/mL、0.713mg/mL、1.166mg/mL、3.702mg/mL。亲和力实验表明，单抗3G8、4B4、4C12与ETH的亲和力常数(Kaff)分别为2.023×109L/mol、1.633×109L/mol、1.607×109L/mol；单抗1H4、2G1、3B5与MTH的Kaff分别为1.100×109L/mol、1.235×109L/mol、1.408×109L/mol。指数相加实验结果表明，抗ENP单抗4B4与4C12识别相同的抗原表位，3G8与4B4或4C12识别的抗原表位则不相关；抗MNP单抗1H4、2G1、3B5识别相同的抗原表位。这些特异性单抗的成功制备分别为EBOV和MARV的诊断奠定了物质基础。