黄原胶是由野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)经过发酵而产生的一种胞外多糖,由于它特殊的理化功能,被广泛应用在各个行业。黄原胶的生物合成是一个既细致又复杂的过程,需要各种酶及蛋白因子的参与,如乙酰化酶、尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶、缩酮丙酮酸转移酶、五种特定的转移酶和多聚酶。乙酰化酶是黄原胶生产过程中一种非常重要的酶,它会影响黄原胶中乙酰基的含量,而黄原胶的乙酰基含量与黄原胶的稳定性及部分理化特性正相关,因此,本实验选取的研究对象为野油菜黄单胞菌的乙酰化酶基因。以野油菜黄单胞菌CICC 10258作为试验菌株,提取基因组DNA,根据基因序列设计特异性的引物,经PCR扩增出乙酰化酶基因片段,与pMD19-T载体连接获得重组质粒并成功克隆该基因。EcoRI酶切重组质粒获得乙酰化酶基因的EcoRI酶切片段,与EcoRI酶切回收的pK18mobSacB自杀质粒相连,构建重组自杀性质粒载体。经鉴定,将重组自杀性质粒载体转化野油菜黄单胞菌CICC 10258的感受态细胞,成功获得了乙酰化酶基因突变体。以野油菜黄单胞菌CICC 10258作为对照,分析和检测突变体的遗传特性。结果表明,本实验敲除了乙酰化酶基因并获得突变体;突变体在营养肉汁培养基中的生长受到抑制,突变体的黄原胶产量减少,突变体的三种胞外酶活性也受到抑制。经与野油菜黄单胞菌CICC 10258作为对照分析,证明乙酰化酶基因与黄原胶的合成、三种胞外酶活性有关。该研究不仅为构建基因工程菌奠定了基础,而且为野油菜黄单胞菌生产黄原胶的研究提供一定的实验数据及理论依据。