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前言膜连蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)属于膜连蛋白家族中的一员,又被称为Annexin A2、CalpactinⅠ重链、LipocortinⅡ、P36,是一类钙依赖性磷脂结合蛋白,在许多的细胞功能中发挥作用,如细胞凋亡,信号转导以及细胞的运动能力。AnnexinⅡ存在于内皮细胞、单核细胞、巨噬细胞、神经细胞和一些肿瘤细胞中,其位于细胞质及细胞膜的胞质面。它在增生和转化的细胞中高表达,在终末分化的细胞中低表达。近年来,研究发现annexinⅡ在胃癌、结肠癌、前列腺癌、肝细胞肝癌、胰腺导管腺癌等肿瘤中异常表达,与肿瘤的侵润转移或预后相关。目前,关于肺鳞癌、腺癌中annexinⅡ的表达与肿瘤的恶性程度及侵袭转移能力均不清楚。本研究通过检测肺鳞癌、腺癌及癌旁肺组织中annexinⅡ的表达情况,分析其与临床病理因素的关系,探讨annexinⅡ在肺癌发生发展中的作用。并通过检测不同侵袭能力肺癌细胞系annexinⅡ蛋白表达水平,提示annexinⅡ在肺癌细胞中表达的差异可能与肺癌细胞的体外侵袭能力相关。材料与方法1、免疫组织化学S-P法检测120例肺鳞癌、腺癌组织标本,标本来自中国医科大学第一附属医院2000~2006年外科手术切除之原发性肺癌组织,所有患者术前均未接受过任何系统的放疗或化疗。标本用中性福尔马林溶液固定,石蜡包埋,制成4μm切片,经脱蜡、脱苯、水化后采用链菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化法(S-P法)检测AnnexinⅡ蛋白(1:200)表达,以PBS代替一抗作为阴性对照。结果判定:AnnexinⅡ以肿瘤细胞胞膜及胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性表达,以染色强度和阳性细胞数比例评定阳性表达。光镜下每张切片选取癌细胞较多的5个高倍视野,每个视野计数100个细胞。着色强度分级为:无色(-)为0分、浅黄色(+)为1分、黄色及更深颜色(++)为2分。阳性细胞数分级为:≤50%为0分、51%-75%为1分、>75%为2分。两项得分相乘结果≥2分为阳性病例。2、Western Blot采用40例新鲜肺鳞癌、腺癌及癌旁正常肺组织标本,均来自中国医科大学第一附属医院2006年5月-2007年7月行外科手术切除的肺癌患者标本。人正常支气管上皮细胞系HBE及人肺癌细胞系BE1、LH7、A549、A2为本实验室冻存。提取组织与细胞蛋白,采用考马斯亮蓝法进行蛋白定量。取等量蛋白,进行SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳和转印,一抗(anti-annexinⅡ1:200稀释,anti-β-actin1:500稀释)和辣根过氧化物酶标记二抗(1:3000及1:2000稀释)孵育,DAB显色。以β-actin为内对照,结果判定为PVDF膜上出现灰色条带,并对条带进行灰度值测定。3、统计分析应用SPSS13.0统计软件分析数据,P<0.05为有统计学意义。结果1、AnnexinⅡ在肺鳞癌、腺癌和癌旁正常肺组织中的表达40例新鲜肺鳞癌、腺癌组织及相应癌旁正常肺组织进行Western Blot分析,结果显示:AnnexinⅡ在肺鳞癌、腺癌和癌旁组织中均有表达,分子量约为36KDa,在癌组织中的表达明显高于癌旁正常肺组织(P=0.02)。免疫组织化学S-P法检测120例肺鳞癌、腺癌组织中AnnexinⅡ的定位和表达情况。结果显示:120例肺癌组织中,79例(65.8%)肺癌组织的癌细胞胞膜及胞浆中出现棕黄色颗粒。2、AnnexinⅡ蛋白在肺癌细胞系中的表达AnnexinⅡ在四种肺癌细胞系及人支气管上皮细胞系均有表达,但肺癌细胞系中蛋白的表达量高于人正常支气管上皮细胞;高侵袭能力肺巨细胞癌细胞BE1annexinⅡ的蛋白表达量明显高于低侵袭能力肺巨细胞癌细胞LH7。3、AnnexinⅡ的表达与肺鳞癌、腺癌临床病理特征间的关系对120例肺鳞癌、腺癌组织中annexinⅡ的表达情况进行x~2检验、统计学分析,结果显示:AnnexinⅡ的表达与分化程度(p=0.000),临床分期(p=0.021),淋巴结转移(p=0.030)有关,与患者的性别(p=0.441),年龄(p=0.703),肿瘤的组织学分型(p=0.844)无关。结论1、AnnexinⅡ在肺鳞癌、腺癌组织中的表达明显高于正常肺组织。2、AnnexinⅡ的表达与肿瘤的分化、淋巴结转移和临床分期有关。3、AnnexinⅡ在肺癌细胞中的表达高于正常人支气管上皮细胞。4、AnnexinⅡ在高侵袭能力肺癌细胞中的表达高于低侵袭能力的细胞。