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本研究以近年禽流感监测分离的H5N1亚型禽流感病毒毒株A/Chicken/Guangdong/S2261/2009（H5N1）和A/Chicken/Jiangsu /S1147/2010（H5N1）为免疫原免疫46周BALB/c鼠,三次免疫并加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,以两株病毒全病毒作为包被抗原进行ELISA检测、并进行血凝抑制试验（HI）检测筛选,阳性细胞经有限稀释法并进行间接的ELISA检测筛选,通过4次的亚克隆获得了6株杂交瘤细胞,均可以稳定地分泌抗HA的抗体,依次命名为GD2611A4、GD2612F5、GD2613D3、JS1471B5、JS1474D1、JS1475C5。对H5亚型HA特异性单抗亚类鉴定表明,GD2612F5和JS1474D1为IgM类,其余为IgG2a亚类,轻链均为κ链。经血凝抑制检测,HA特异性六株杂交瘤细胞可以和绝大部分禽流感病毒毒株结合,具有较好的广谱性和稳定性。染色体数值符合脾细胞与骨髓瘤细胞的染色体数目之和。六株杂交瘤细胞的HI效价依次为:212、212、211、210、212、210。血凝试验结果表明所制备杂交瘤细胞与禽流感病毒其他亚型及新城疫病毒无交叉反应。经冻存复苏后,仍具有较高的抗体水平,所获杂交瘤细胞均与感染了相应H5亚型AIV的293T发生特异性结合,捕获荧光标记的二抗,在荧光显微镜下发出明亮的绿色荧光。特异性的禽流感H5亚型的抗HA的单克隆抗体的成功制备,为AIV的监测、诊断及鉴别诊断提供良好的物质基础,为研究病毒HA抗原结构与功能提供物质手段。根据AIV HA株基因组序列,设计合成特异性PCR引物,通过常规PCR方法扩增禽流感H5亚型的HA基因,克隆得到的HA基因,定点插入到转移载体PFastbac1中成功构建重组的转移载体,构建好的重组转移载体转座DH10感受态,进而获得重组的转座子,通过转染昆虫细胞获得重组的杆状病毒,大量增殖悬浮培养获得表达蛋白,对蛋白进行常规的电泳转印及Western-blotting鉴定,同时做免疫荧光鉴定,鉴定阳性的蛋白用纯化带His标签蛋白的方法进行纯化,并将纯化好的蛋白经过凝胶过滤层析分离低聚物和三聚体,获得浓度较高并具有血凝活性的三聚体蛋白,为H5亚型流感病毒可能抗原结构位点的预测和定位提供基础。