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铁皮石斛(Dendrobium candidum)为兰科石斛属多年生附生草本植物,是被药典收录的5种石斛属植物之一,被誉为石斛类中的极品,其有效成分主要为石斛多糖、石斛碱和氨基酸等,其中石斛多糖含量高21.7%,能显著提高机体免疫功能,具有养胃出津、补肾益力、滋阴清热、耐缺氧、抗疲劳、抗肿瘤等功效。本论文利用组织分离法、菌片法对采自广西环江县木伦国家自然保护区的野生铁皮石斛(Dendrobium candidum)内生真菌的种类及其生物活性进行了初步研究。结果如下:1、利用组织分离法首次从广西环江产铁皮石斛的根中分离到37株内生真菌。以经典形态学分类方法,采用萨卡图(Samardo)和休斯-塔巴基-巴伦(Hugues-Tubaki-Barron)真菌分类系统对分离获得的37株内生真菌进行显微形态特征的观察和鉴定,共鉴定出4株产孢的内生真菌,分别属于镰胞菌属、头孢霉属和拟小卵孢属,其余33株内生真菌在本试验条件下不产生孢子,为无孢类群,占总分离菌数的89.2%。对33株不产孢的菌株进行了rDNA ITS序列测序,并与GeneBank中序列相似性较高的已知菌株进行了比较分析,确定了序列相似性高的30个菌株的分类地位。2、在所得的37株内生真菌中,共筛选出7株对铁皮石斛组培苗有促生长作用的菌株。7个菌株对铁皮石斛组培苗的多糖含量均有较大的影响。与对照相比,组培苗的多糖含量最高能提高76.5%。3、选用大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtills)、白色念珠菌(Candidaalbicams)、新型隐球酵母菌(Cryptococcus neoformans Vuillemin)和烟曲霉(Aspergillus fumigatus Fresenius),分别代表了G~+、G~-及真菌,对获得的37株内生真菌进行了抗菌活性的筛选。结果表明,有18株内生真菌对至少1种试验菌株有抗菌活性,占总分离菌株的34.6%,可见铁皮石斛内生真菌中蕴藏着丰富的抗菌活性菌株资源。4、首次用从铁皮石斛中分离出的87株内生真菌对铁皮石斛黑斑病菌AF-02和AF-04进行了抗菌活性的筛选。结果表明,有7株内生真菌对至少一种试验菌株有抗菌活性,占总菌株数的8.1%,可见铁皮石斛内生真菌中也蕴藏着抗黑斑病的菌株资源。