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乙肝病毒核心蛋白病毒样颗粒(Hepatitis virus B virus core protein virus likeparticles，HBc VLPs)因其不具有乙肝病毒的复制能力而又具备较强的免疫原性而被广泛应用于构建新型疫苗。另一方面，HBc VLPs的正二十面体空腔结构和解聚/自组装特性使得其还能够作为纳米载体呈递基因、纳米粒子等。本课题利用HBc VLPsC末端的富集正电荷序列可以通过静电吸引力与核酸相互作用的特点，构建了一种同时包裹有CpG寡核苷酸链(CpG ODNs)佐剂和金纳米粒子的HBc VLPs，对其跨细胞膜机制和免疫刺激能力进行了初步研究，具体工作如下: 1.构建CpG-Au@HBc VLPs纳米复合物:1）在原核表达系统（E.coli）内诱导HBc VLPs蛋白的表达，采用盐析和色谱柱分离的方法纯化出较纯的HBcVLPs蛋白;2）以“种子生长法”和改良的Frens法合成出不同粒径、尺寸较均一的纳米金球(Au NSs)，通过加盐老化的方法在Au NSs表面接上巯基化的CpGODNs;探究了不同粒径大小(5-15 nm)的Au NSs与巯基化CpG ODNs的连接效率，研究发现粒径越小的Au NSs体系在与CpG ODNs连接过程中越稳定，15nm Au NSs体系则较易聚沉;3）HBc VLPs蛋白解聚后能够与CpG-Au NPs因静电相互作用结合并实现包封，形成壳核结构的CpG-Au@HBc VLPs纳米复合物。 2.通过MTT实验对CpG-Au@HBc VLPs纳米复合物的细胞生物相容性进行了评价;利用流式细胞术证实了CpG-Au@HBc VLPs能够有效进入RAW264.7细胞，同时结合几种不同的胞吞途径特异抑制剂确定了其跨膜进入细胞的机制;此外，利用相差显微镜观察了CpG-Au@HBc VLPs对细胞形态的影响。 3.建立小鼠免疫实验模型，研究CpG-Au@HBc VLPs纳米复合物的免疫刺激能力，结果显示:1）细胞免疫应答能力强:小鼠脾细胞中CD4+、CD8+T细胞表达量及Th1型细胞因子IFN-γ分泌量明显高于其它组（HBc VLPs组、CpG@HBc VLPs组及弗氏佐剂与HBc VLPs联用组）;2）能引发中等程度的体液免疫应答:小鼠血清中抗HBc抗体滴度及Th2型细胞因子IL-4分泌量高于HBcVLPs组和CpG@HBc VLPs组，达到传统弗氏佐剂（强体液免疫诱导佐剂）与HBc VLPs联用组的一半以上;3）Au NPs在促进整个复合物的体液和细胞免疫刺激效果中都发挥了作用（与CpG@HBc VLPs组相比较），有类似佐剂的效应。