铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）在自然环境中广泛分布,是土壤中的常见病原菌之一,同时也是医院内三大易感染致病菌之一。铜绿假单胞菌可分泌多种次生代谢产物,被认为是重要的生物防治菌,其次生代谢产物不仅被发现具有广谱抗菌活性（如吩嗪类物质）,还被认为有抑制炎症和细胞增殖的潜力（如环二肽）。而铜绿假单胞菌次生代谢产物的分泌与生物被膜（BF,bacterial biofilm）息息相关,同时也与群体感应系统（QSS,quorum sensing system）和六型分泌系统（T6SS,type VI secretion system）有关,因此调控次生代谢产物合成与分泌的基因可能影响到生物被膜、群体感应系统和六型分泌系统相关基因的表达。本实验通过建立脂多糖（LPS,lipopolysaccharide）诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞炎症模型,探究了铜绿假单胞菌分泌物CEPA（chloroform extract of Pseudomonas aeruginosa）和纯化产物1-羟基吩嗪（1-hydroxyphenazine）的体外抗炎活性及作用的分子机制;同时利用铜绿假单胞菌野生菌株2016NX1与构建的高产吩嗪菌株2019NES（可高表达phz R基因）,探究了phz R基因对生物被膜、群体感应系统和六型分泌系统相关基因表达的影响。方法与结果如下:1.采用MTT法检测细胞存活率,确定LPS、CEPA和1-羟基吩嗪对RAW264.7细胞存活率的安全浓度,以进行后续实验。结果显示,LPS在0～10μg/m L、CEPA在0～20μg/m L、1-羟基吩嗪在0～5μg/m L浓度范围内,对细胞活力无明显影响,为细胞安全浓度;2.通过ELISA法测定了CEPA和1-羟基吩嗪对细胞分泌TNF-α水平的影响,结果表明二者均能抑制TNF-α的分泌,且呈浓度依赖性,药物浓度越高,抑制效果越明显;3.形态学观察法确定CEPA和1-羟基吩嗪处理后细胞形态的变化,发现仅LPS刺激时,细胞体积增大、伸出伪足,同时加入CEPA或1-羟基吩嗪共同处理后,随药物浓度的增加,细胞体积减小,伪足变短,有恢复成正常细胞形态的趋势;4.RT-q PCR法检测了炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6 m RNA的表达水平变化,结果表明,CEPA和1-羟基吩嗪均能抑制TNF-α、IL-1β和IL-6 m RNA的相对表达,随着两种药物浓度的增加,TNF-α、IL-1β和IL-6 m RNA的表达水平逐渐下降,说明CEPA和1-羟基吩嗪对m RNA的表达有抑制作用;5.RT-q PCR法比较了铜绿假单胞菌野生菌株2016NX1和工程菌株2019NES二者生物被膜（fil C、psl A、pel A、pil A）、群体感应系统（las R）和六型分泌系统（hcp1、hcp2、hcp3）基因的表达差异,结果表明,浮游状态下仅las R和pil A有显著差异,2019NES的表达水平低于2016NX1,被膜状态下las R、psl A和pel A有显著性差异,同样是2019NES的表达水平较低;6.采用结晶紫染色法测定了2016NX1和2019NES在12 h、1 d、3 d和6 d时间段内生物被膜量的表达,结果显示,随着培养时间增加,两种菌株生物被膜的量均呈上升趋势,但2016NX1生物被膜的量持续高于2019NES;7.利用平板分析法比较了2016NX1和2019NES蹭行运动（twitching）、泳动（swimming）和集群运动（swarmming）的能力,表明二者蹭行运动能力相同,泳动能力2019NES强于2016NX1,集群运动能力2016NX1强于2019NES。综上,CEPA和1-羟基吩嗪能抑制炎性因子的分泌、降低炎症基因的表达、有助细胞恢复正常形态,有一定抗炎作用;同时,phz R基因可影响生物被膜、群体感应系统和六型分泌系统相关基因的表达,降低生物被膜量的形成,并对细菌运动性产生影响。