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桑椹为桑科桑属桑树(Morus alba L.)的成熟果穗,不仅滋甘味美,而且富含多种营养成分,是首批入选国家卫生部“药食同源”名录的品种。中医认为桑椹具有滋阴养血、镇静安神、补肝益肾、养颜益智、乌发明目、延年祛斑、降压消渴等诸多功效。现代医学研究证实,桑椹具有促进造血细胞生长,防止血管硬化,调节血糖和血脂,抗诱变,抗病毒,抗氧化,抗衰老等诸多药理作用。此外,还有少量文献报道了桑椹对酒精/四氯化碳所致的肝损伤有潜在的保护作用;本课题组前期研究也发现桑椹具有激活乙醇脱氢酶(ADH)的活性,显示其具有潜在的解酒护肝作用,值得深入研究。近年来,酒精性肝损伤的发病率和致死率迅速增加,严重威胁着人们生命健康,急需解酒护肝药物。但是,桑椹是否真正具有解酒护肝功效,药效怎样,其药效物质是什么等相关问题尚不清楚。为解决这一系列问题,本论文拟从桑椹抗酒精性肝损伤的药效学评价和药效物质基础方面着手,对桑椹进行深入研究,为其产业化、综合利用及价值提升提供科学的数据支撑。围绕上述科研目标,本论文从以下几个方面展开了桑椹的药效学及药效物质基础研究。首先,基于ADH激活作用,从分子水平对桑椹的不同极性部位提取物进行了活性筛选研究,确定了桑椹多糖(FMPS)具有突出的激活ADH活性;其次,在活性部位筛选的基础上,通过分离、纯化制备了FMPS,并以此开展了其体外/体内抗酒精性肝损伤的效果评价研究,从分子学和整体动物模型的层面证实了其抗酒精性肝损伤作用;再次,在药效学评价的基础上,对桑椹多糖进行了初步表征,为研究“构-效”关系奠定了基础;最后,对桑椹中FMPS的提取工艺进行了全面研究,为其工业化大生产提供了理论依据。具体结果如下:一、基于ADH激活作用的桑椹活性部位筛选研究本研究以ADH活性为指标,建立了精确灵敏、高效快捷、操作简便的体外ADH活性评价模型;并采用所建模型对桑椹鲜果的活性部位进行深入探索。经统计分析显示,桑椹鲜果的三种不同提取物(乙醇、甲醇和水提取物)对ADH的激活率分别为89.34±2.26%(n=6,RSD=2.54%)、59.56±1.06%(n=6,RSD=1.79%)和135.45±2.96%(n=6,RSD=2.19%),具有显著性差异(P<0.05)。因此,选择桑椹水提取物作为抗酒精性肝损伤的活性部位。在上述桑椹活性部位筛选研究的基础上,将桑椹水提物进行脱脂、脱色、除蛋白等纯化处理,得到中性糖含量为67.96±2.46%的FMPS;同等质量浓度下,该FMPS对ADH的激活率明显大于桑椹水提物(P<0.05);并且在25.24μg·m L-1~176.68μg·m L-1的浓度范围内对ADH激活率有明显量效关系。二、基于整体动物模型试验的桑椹抗酒精性肝损伤作用研究通过建立小鼠急性、亚急性酒精性肝损伤模型,开展FMPS抗酒精性肝损伤作用的研究。结果如下:急性酒精性肝损伤模型中FMPS各剂量组均对乙醇所致的血清ALT、AST和肝脏MDA的升高起抑制作用,其中高剂量组的作用效果极为显著(P<0.01),较之模型组分别降低31.71%(P<0.01)、40.90%(P<0.01)和30.10%(P<0.01);相反,FMPS各剂量组均能对抗乙醇所致的肝脏组织中GSH、SOD和GSH-Px的降低,其中高剂量组的作用效果极为显著,较之模型组分别提高了73.22%(P<0.01)、40.90%(P<0.01)和20.23%(P<0.01)。亚急性酒精性肝损伤模型中FMPS各剂量组均对乙醇所致的血清ALT、AST和肝脏MDA的升高起抑制作用,其中高剂量组的作用效果极为显著(P<0.05),较之模型组分别降低45.23%(P<0.01)、54.38%(P<0.01)和22.22%(P<0.05);相反,FMPS各剂量组均能对抗乙醇所致的肝脏组织中GSH、SOD和GSH-Px的降低,其中高剂量组的作用效果极为显著,较之模型组分别提高了52.45%、19.65%和20.63%(P<0.05,P<0.05,P<0.01)。三、桑椹多糖化学表征为了进一步阐明桑椹抗酒精性肝损伤的药效物质基础,本文采用精密的分析方法对桑椹多糖的物质组分、组成比例进行了研究,发现FMPS中含总糖67.96%,糖醛酸18.51%,蛋白质1.63%,硫酸基6.21%;桑椹多糖是一种杂多糖,其单糖组成及比例为:甘露糖50.54%,葡萄糖21.53%,半乳糖18.13%,半乳糖醛酸1.51%,葡萄糖醛酸2.41%,木糖2.22%,鼠李糖2.01%,阿拉伯糖1.50%,L-岩藻糖0.61%。四、桑椹多糖提取工艺研究本实验采用酶辅助超声波提取,先进行单因素筛选,再结合响应曲面法,以桑椹多糖提取率、抗氧化活性和ADH激活率为综合评价指标,对桑椹多糖的提取工艺进行系统研究。根据中心组合设计原理,建立了多糖提取率与酶处理温度(℃)、酶的用量(%)、溶剂(水)用量(倍)及酶处理时间(min)的二次多项式数学模型,得到最佳提取工艺参数为:酶处理温度为58℃,酶用量为0.30%,溶剂(水)用量为11.00倍,酶处理时间为38 min,超声处理时间为20 min,在此工艺参数下,桑椹多糖的提取量为16.16±0.14 g·(100 g桑椹)-1,是单纯超声波处理条件下桑椹多糖提取率的1.61倍。