研究发现,外源及自身DNA可通过胞内DNA感受器启动固有免疫应答,近年来对新型DNA感受器的鉴定及其功能调控迅速成为免疫学领域的新兴方向和重要学术关注。　　 在本研究中,为了探讨HMGB1在新型DNA感受器PolⅢ识别外源DNA中的作用机制,我们首先通过Real-time PCR检测poly(dA-dT)刺激后细胞内HMGB1在mRNA水平上的表达情况。结果显示,HMGB1在293T细胞内上调达40倍,在Raw264.7细胞中上调约7倍。接下来,我们分析了HMGB1在PolⅢ识别poly(dA-dT)产生IFN-β中的作用。当使用ML60218抑制剂特异性阻断PolⅢ的活性后,IFN-β的表达水平显著下降,且呈现明显的剂量依赖性;当ML60218使用浓度为10μM时,IFN-β的表达相比未抑制组下调5倍左右,表明DNA感受器中PolⅢ对IFN-β的产生发挥关键性作用。随后,我们通过调控细胞内HMGB1的表达量来探讨其在PolⅢ-RIG-Ⅰ通路中作用。在HMGB1上调表达过程中,因HMGB1的本底表达水平较高,我们未观察到HMGB1对IFN-β产生的影响;在HMGB1下调表达过程中,我们以携带特异性shRNA的慢病毒载体稳定下调HMGB1表达后发现,poly(dA-dT)刺激细胞产生IFN-β的能力大幅下降,约8倍左右,表明HMGB1参与了PolⅢ对外源DNA的识别过程。　　 为了进一步研究HMGB1和PolⅢ在细胞内可能存在的相互作用,我们运用了免疫共沉淀技术和荧光共定位分析。免疫共沉淀实验中,我们以HMGB1为诱饵蛋白,检测免疫沉淀复合物中带有Flag标签PolⅢ亚基POLR-3D的表达。结果显示,HMGBl与PolⅢ不存在直接相互作用。但在荧光共定位实验中,我们发现带有不同荧光蛋白标签的PolⅢ亚基POLR-3D和HMGB1,在293T和Raw264.7细胞内存在共定位,这一现象提示HMGB1可能通过间接结合方式调控了PolⅢ对外源DNA的识别及下游Ⅰ型干扰素的分泌过程。　　 本研究着重探讨胞质DNA感受器识别外源DNA的调控机制,对于该机制的阐明不仅有助于我们发现胞质DNA启动下游固有免疫应答的关键节点,更有望为由DNA异常聚集诱导的自身免疫性疾病SLE的新型防治策略提供可能治疗靶点,因此具有重要的理论和实际应用价值。