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研究目的：1.阐明P44/WDR77在肿瘤细胞生长过程中的重要作用2.研究肿瘤细胞及增生活跃的细胞逃逸TGFβ生长抑制作用的机制研究方法：通过慢病毒表达针对P44的shRNA而抑制其正常表达。本实验所涉及的不同的肿瘤细胞系均在表达非靶向shRNA或者P44shRNA后,以2000/孔的密度铺24孔板,每天计数,持续7天,得到生长曲线。通过Western Blot法检测P44, HSP90β, actin, c-Myc, c-Jun, Smad3, Smad3-pS425等目的蛋白的表达情况。通过DNA microarray和RT-PCR方法了解TGF β信号通路下游目的基因的表达情况。构建包含有4个串联Smad反应元件(SBE, GTCTAGAC)的荧光素酶报告质粒(pGL3-4xSBE-E4-luc),使用PC3细胞进行报告基因检测。免疫染色法检测小鼠肺组织切片,全层皮肤切片以及人肺癌组织切片中P44, TGFβ, TβRⅡ以及Smad3的表达情况。结果：1.抑制P44的表达能够明显抑制多种肿瘤细胞的生长,包括：肺癌(A549),前列腺癌(PC3),胰腺癌(ASPC-1, PANC-1),乳腺癌(MDA MB231),结肠癌(HCT116)及黑色素瘤(WM2664)；2.抑制P44的表达能够明显导致Smad2/3的磷酸化及向细胞核内的转运,TGFβ通路的部分目的基因的转录活性提高,同时TGFβ2和TGFβ RⅡ的蛋白表达量也明显升高；3.在A549细胞中,当培养基中TGFβ2的浓度达到0.1ng/ml时可以观察到明显的Smad3向细胞核内的转运现象。但是当A549细胞的P44表达被抑制后,TGFβ2的浓度只需要0.001ng/ml即可观察到相同的现象。随着P44表达的抑制,TGFP2对于A549和PC3的生长抑制效应也得到了明显的增高；4.在小鼠皮肤再生过程中,P44的表达从第5天起明显升高,和角质细胞的增殖相一致。而当在切口愈合后(第7天后),P44的表达逐渐局限于基底部,此时也只有这部分的细胞处于增殖状态。在整个切口全层均能发现TGFβ的存在,但是在P44表达的增殖活跃区域,Smad3并未向核内发生聚集。而在不表达P44的区域,可以看到TβRⅡ的表达以及Smad3向细胞核内转运的情况；5.对肺癌组织切片染色,发现P44在恶性增殖部分高表达,而在正常的肺组织结构中未表达。在正常区域和增生区域均有TGFP的表达,但是TβRⅡ的表达以及Smad3的核内聚集现象在正常区域更加明显。结论：1.P44/WDR77的表达是多种肿瘤生长所必须的；2.抑制P44/WDR77的表达能够激活TGFβ信号通路,并且P44/WDR77的表达通过抑制TGFβ2和TβRⅡ的表达而限制了TGFβ信号通路的作用；3.P44/WDR77的表达导致处于增殖状态的细胞对TGFβ信号通路不敏感,从而可能促进正常的细胞增殖(皮肤缺损修复)和肿瘤发生(肺癌)。