siRNAs抑制猪圆环病毒复制的研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zezongji
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
猪圆环病毒属圆环病毒科,是一种小型、无囊膜,单链DNA病毒。该病毒有两种基因型,即圆环病毒1型(PCV1)和圆环病毒2型(PCV2)。研究发现PCV1和PCV2在全球范围内广泛流行。虽然一直以来都没有证据证明PCV1致病,但是其潜在的危险不容忽视,尤其是猪作为各类器官移植供体的时候。PCV2是断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)、猪皮炎和肾病综合症(PDNS)、先天性震颤、早产、渗出性皮炎等重大传染病的“罪魁祸首”。尽管PCV感染给养猪业带来了重大灾难,但是目前还缺乏有效的疫苗来防治。RNAi是siRNA介导的转录后抑制机制,为人们预防和治疗病毒感染开启了希望之门。本研究以PCV1和PCV2的复制蛋白Rep为靶基因,我们构建了3个针对PCV1和PCV2共同靶序列三个的siRNAs表达质粒(pS-RepA,pS-RepB,pS-RepC),并在细胞水平上研究它们对PCV1和PCV2的复制的抑制作用。1.siRNAs对PCV2 Rep基因表达的抑制本研究构建了Rep基因与EGFP融合的真核表达质粒(pCDRep-EGFP),并分别与pS-RepA,pS-RepB和pS-RepC 3个siRNAs表达质粒共转染PK-15细胞。经荧光观察、流式细胞仪检测、Western blot、RT-PCR等方法证实:pS-RepA,pS-RepB,pS-RepC对PCV2 Rep基因表达都有显著的特异性抑制作用,其中pS-RepA和pS-RepB抑制效果达到20%—50%,而pS-RepC抑制效果最佳为84.5%。2.siRNAs对PCV1和PCV2复制的抑制将上述构建的3个siRNAs表达质粒分别转染PK-15细胞,24小时后感染PCV1或PCV2病毒,经Real-time PCR、Western blot、TCID50等方法证实:在3个siRNAs序列中pS-RepA,pS-RepB,pS-RepC对PCV1和PCV2的复制都有特异性抑制作用,其中pS-RepC对PCV1和PCV2的复制及结构蛋白的表达均具有显著的抑制能力。本研究表明:针对PCV1和PCV2 Rep蛋白共同靶序列的siRNAs可以实现对二者复制的共同抑制,RNAi可以作为一种新的、具有应用潜力的方法应对PCV感染,而pS-RepC则可以作为一种有效的siRNAs序列。
其他文献
随着信息化时代的到来,网络信息技术也在迅速发展,并且逐渐渗透到了人们生活的各行各业,尤其对于我国教育行业的发展而言意义重大.本文通过对传统教育中存在的问题进行全面分
小学教育是启蒙教育,因为小学教育是在人的初期阶段给予帮助,让人能够形成最初的三观雏形,而之后的学习和发展,就是不断完善其最初的人格和三观,而在小学阶段,语文学科在这方
与小学阶段不同,初中数学课程无论是在教学难度、目标要求等各方面都发生了很大变化.这种情况下,如果学生不能快速适应这些变化,久而久之,就会跟不上教师的教学步伐,逐渐失去
摘要:本文探讨了信息技术环境下英语视听教学的策略。对教师教学方式、学生学习方式和师生互动方式以及如何利用信息技术组织语言素材提出了建议。   关键词:信息技术 英语视听 教学策略    教育部最新颁布的《大学英语课程教学要求》提出:“新教学模式应以现代信息技术为支撑,特别是网络技术,使英语教学朝着个性化学习、不受时间和地点限制的学习、主动式方向发展。”因此,网络教学成为今后大学英语教学的一种发展趋