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目的:本实验利用RNA干扰技术,以乳腺癌细胞为研究对象,下调乳腺癌细胞系中的基因CCR7的表达对乳腺癌细胞转移的影响,并行蛋白质谱检测,研究沉默CCR7后哪些蛋白和信号分子参与CCR7的调控作用,对探讨CCR7与乳腺癌转移的内在机制,发现新的诊断标记物及治疗靶点具有积极的意义。方法:1、常规培养乳腺癌细胞系MDA-MB-231、4T1-luc、MDA-MB-361、T47D、MDA-MB-468、MCF-7、MCF10A、184B5、184A1、HCC1806、HCC1937、HCC1580、MCF10A,用q-PCR和Westen blot实验筛选出高表达CCR7的乳腺癌细胞系。2、对筛选出来的乳腺癌细胞株进行转染,提取实验组(CCR7-siRNA)和对照组的总RNA和总蛋白,用q-PCR和Western blot检测干扰效果。3、利用划痕实验和transwell小室迁移实验检测了siCCR7转染对乳腺癌细胞迁移的影响。4、通过蛋白质谱结果筛选出差异表达蛋白,并用q-PCR验证参与CCR7的调控作用关键蛋白。结果:1、高表达CCR7的乳腺癌细胞系的筛选q-PCR结果显示:人乳腺癌细胞株T47D、HCC1500、SK-RB-3、BT474、MCF7的CCR7的mRNA表达水平较其他乳腺癌细胞株高。高表达CCR7的乳腺癌细胞系的筛选Western blot结果显示:CCR7在小鼠乳腺癌细胞株4T1-Luc、人乳腺癌细胞株T74D、MCF7中高表达,在部分乳腺癌细胞株中如MB231、MB468、HCC1937中有较高水平的表达。但是在正常乳腺细胞株如184B5、184A1和MCF10A中几乎无CCR7表达。最后我们选取MCF7及T47D乳腺癌细胞进行后续的实验。2、T47D、MCF7细胞在经过siRNA处理后,通过q-PCR检测对T47D、MCF7乳腺癌细胞的沉默效应,结果显示CCR7-siRNA 1#和CCR7-siRNA 2#能非常有效地抑制T47D、MCF7细胞中内源性CCR7的mRNA水平的表达。Western blot得到相似的结果。3、划痕实验和transwell小室迁移实验结果均表明,与shLacZ组比,shCCR7C组和shCCR7D组乳腺癌细胞迁移能力变弱。4、通过蛋白质谱结果筛选出差异表达蛋白如下:EPHA2、PVR、SQSTM1、ANXA6、PTRF、ALDH3A2、EPCAM。并用q-PCR方法及Western blot方法验证沉默CCR7后ALDH3A2和PTRF可能参与CCR7的调控作用。结论:(一)CCR7在不同的乳腺癌细胞株的表达量有所不同,在恶性程度较高的细胞中表达量更高,说明可能CCR7的表达水平的高低与乳腺癌转移的恶性程度有一定相关性。(二)敲低CCR7后抑制了乳腺癌细胞的迁移,引起了 ALDH3A2及PTRF的降低。(三)干扰CCR7抑制乳腺癌细胞的迁移可能通过下调ALDH3A2和PTRF的表达实现,这需要进一步研究。