黄芪总黄酮的提取分离及其指纹图谱和生物活性的研究

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黄芪是中国传统的中草药,具有补气固表、利尿托毒、敛疮生肌之功效,其应用已经有数千年的历史。黄芪总黄酮、黄芪总皂苷、黄芪多糖和氨基酸等为黄芪的主要有效成分。其中,黄芪总黄酮是由多种结构相似的黄酮类化合物所组成的一类复杂混合物。其化学成分包括黄酮醇及其苷类、异黄酮及其苷类。目前,对黄芪总黄酮的提取方法主要有乙醇回流提取法、超声波提取法、微波提取法等。但是,这些方法对黄芪总黄酮的提取率普遍不高。本文采用闪式提取法提取黄芪总黄酮,正交试验结果表明,当提取次数为3次、料液比为1:10、提取时间为1min、提取温度为60℃时,为最佳的提取工艺条件,黄芪总黄酮的含量达到2.95mg/g。黄芪总黄酮的组成成分十分复杂,本论文利用高效液相色谱法成功分离出毛蕊异黄酮苷、刺芒柄花素、毛蕊异黄酮和芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷这四种活性成分。其中,毛蕊异黄酮苷和刺芒柄花素两者在黄芪黄酮四种活性成分中的含量是最高的。图谱显示出四个峰形独立、分离较好的主要特征峰,从而建立起8种不同产地不同等级黄芪的高效液相指纹图谱。很多植物黄酮类化合物都有较强的抗氧化活性,但是,尚未见黄芪总黄酮抗氧化活性相关方面的研究。本论文初步测定了黄芪总黄酮对ABTS+自由基和DPPH·自由基的清除能力,结果表明黄芪总黄酮具有良好的抗氧化性,对ATBS+自由基和DPPH·自由基的半抑制浓度分别为0.61mg/ml和4mg/ml。另外,本论文还探讨了黄芪总黄酮对小鼠免疫功能的影响。按照中医“饥则气损”理论,以控制动物饲料量获得的“气虚证”小鼠为模型,研究了黄芪黄酮的“补气”功能。与空白对照组小鼠对比,“气虚证”模型组小鼠的负重游泳时间、吞噬指数、胸腺指数、脾脏指数等均有明显的降低,其血液粘度和迟发型变态反应则有明显的提高。而给予一定黄芪黄酮治疗后的药物组小鼠,结果显示检测的各项指标都恢复了正常。实验结果表明黄芪黄酮具有“补气”作用,进一步增强了“气虚证”小鼠机体的免疫功能。
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