SARS恢复期血清抗体图谱及动态变化的分析

来源 :中国药品生物制品检定所 中国食品药品检定研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xczsb
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
严重急性呼吸综合征简称SARS(SevereAcuteRespiratorySyndrom)。自2002年11月,在我国广东省发现第一例病例以来,SARS迅速蔓延并相继在近30个国家出现了疫情,成为21世纪威胁全球人类健康的新型严重传染疾患。 SARS的特异诊断方法是基于微生物学及血清学研究。SARS病毒是一种新型冠状病毒,具有多种结构蛋白和非结构蛋白,感染机体后可诱导产生针对多种病毒蛋白的抗体。目前对每种抗体在疾病诊断、进程及预后的意义、抗体产生的动力学以及单一抗体与全病毒抗体的相关性仍不完全清楚。 本课题主要选用SARS冠状病毒的主要结构基因,采用PCR方法,分段扩增SARS的N基因(分为N1、N2两个片段和N全长基因)和S基因(分为S1、SC和S2三个片段),共6个基因片段。然后将各基因片段克隆到原核表达质粒载体pET30a(+)上,得到重组质粒pET-SARSN、pET-SARSN1、pET-SARSN2、pET-SARSS1、pET-SARSSC和pET-SARSS2,并使其在大肠杆菌中诱导表达。通过亲和层析、离子交换、疏水层析、电洗脱等方法对这些重组蛋白进行了纯化,得到了纯度在95%以上的目的蛋白。纯化产物经Westen-Blot鉴定均有特异性抗原活性。 检测58份SARS病人恢复期3个月的血浆,在恢复期3个月这一时间剖面上对SARS血浆中针对SARS-CoV各抗原片段的IgG抗体进行描述:SARS-CoVN、N1、N2、S1、Sc、S2和M蛋白的阳性检出率分别为:3.5%、91.4%、75.9%、50.0%、81.0%、86.2%和96.5%。可以看出恢复期3个月血浆中针对SARS-CoV各抗原片段的IgG水平各不相同。 用北京华大GBI生物技术有限公司生产的SARS冠状病毒抗体ELISA检测试剂盒检测该58份SARS恢复期血浆,其IgG检出率为89.7%,IgM检出率为1.7%。可以看出恢复期3个月血浆中IgG仍存在较高水平,而IgM则水平较低。 分析N1、N2、Sc、S2和M蛋白和全病毒检测结果的相关性,结果显示N1蛋白与N2蛋白及全病毒抗原的相关性较好(r>0.65);Sc蛋白与S2蛋白无相关关系,与全病毒抗原弱相关(r=0.396);M蛋白与N1蛋白弱相关(r=0.280),与其它蛋白及全病毒抗原均无相关关系。认为S、M蛋白作为SARS-CoV的另两个主要结构蛋白,其抗原性与N蛋白互为补充。 检测梯度稀释后的12份样品,结果显示:经梯度稀释后的血浆对SARS-CoVN、S蛋白的反应差别明显,其中P20号血浆对SARS-CoVN蛋白的反应高于S蛋白(N1和N2的稀释度为1:4和1:8;SC和S2的稀释度均为原倍),P12号血浆对SARS-CoVS蛋白的反应高于N蛋白(N1和N2的稀释度为原倍和1:2;SC和S2的稀释度为1:8和1:4)。选择该两份血浆,分别作为N蛋白和S蛋白的灵敏度检测参考。 检测40份SARS系列血清。发现针对SARS-CoVM蛋白的抗体在发病早期(10~14天)检出率(87.5%)较N,S蛋白的检出率高,提示其作为早期诊断试剂具有一定意义,随病程延长,其检出率有上升趋势;针对SARS-CoVN,S蛋白的抗体的在发病早期检出率相对较低(均低于62.5%),但随病程延长,检出率有上升趋势。 同时,对人冠状病毒OC43N蛋白和人冠状病毒229EN蛋白进行表达和纯化,并包被聚苯乙烯板,使用间接ELISA方法检测58份SARS恢复期3个月血浆,其阳性检出率均为0%,提示SARS冠状病毒与人冠状病毒无交叉反应。
其他文献
尊敬的各位领导、各位来宾、同志们:今天,我们怀着兴奋的心情,隆重集会庆祝中国电视事业暨中央电视台诞生40周年。在这里,我首先代表中央电视台全体职工对中央领导和各位来宾的光
‘桂榄1号’是从广西乌榄实生群体种中选育出的新品种,果实椭圆形,平均单果质量12.8g,可食率65.5%,果核出仁率11.3%,果实蛋白质含量2.7%,脂肪含量3.5%,钙含量3215mg·kg-1,镁
严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)又称传染性非典型肺炎,是一种严重危及人类生命健康的新发传染病,从2002年11月在中国广东省首先出现并爆发流行
临床上,肋骨外伤骨折、肋骨转移瘤常见,诊断主要依靠X线平片及CR检查,但对轻微线形骨折、早期转移瘤常有漏诊。CT横断扫描肋骨虽已得到应用,但存在计数不准,范围局限等缺陷。因此
20多年来免疫组化技术得到了迅猛的发展。这项技术在病理诊断中得到了广泛应用,目前已成为了病理诊断工作中不可缺少的重要工具。免疫组化在帮助疾病诊断、预后判断、指导临床
实验目的:本实验通过建立D-半乳糖(D-galactose)诱导的大鼠亚急性衰老动物模型,观察绞股蓝对衰老大鼠下丘脑的保护作用,并探讨其作用机制。 实验方法:40只SD雄性大鼠,体重180-2
目前,亚单位疫苗在临床试验中的效果并不理想,因此人们对DNA疫苗及活载体疫苗寄予了厚望.这两种疫苗都能在细胞内以天然的方式合成加工抗原并呈递给免疫系统,从而诱导体液和
目的研究急性脑血管病患者血糖变化以及糖代谢相关酶和激素在血糖升高中的作用。 方法采用葡萄糖氧化酶法检测67例非糖尿病急性脑血管病患者的血糖水平,根据血糖值分为
1996年6月25日,国际广播电台对印度的印地语广播部开办了一个固定专题节目《今日西藏》,每两周播出一次,每次10到20分钟。节目播出后,很快受到印度广大听众的热烈欢迎。印度伊拉
卵巢癌是三大妇科恶性肿瘤中的“头号杀手”。除了手术,化疗是其重要的治疗手段,但卵巢癌的化疗耐药尤其是多药耐药是导致患者五年生存率停滞不前的主要原因。目前低氧微环境因