磷脂与蛋白的相互作用及金属离子的影响和肿瘤组织的FTIR谱学诊断方法

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本文包括了两部分内容。 第一部分:磷脂与蛋白的相互作用及金属离子的影响 研究金属离子与生物膜的相互作用具有重要的理论和实际意义。FTIR光谱被广泛应用于金属离子与生物膜相互作用的研究当中,但多以单纯磷脂或者混合磷脂来构建生物膜模拟体系。从我们的初步研究结果中发现,在探讨金属离子与质膜相互作用时不应忽视膜蛋白和膜脂之间存在的相互作用。然而关于金属离子对脂膜-膜蛋白复合体系的FTIR谱学研究却少有报道,因此我们认为有必要开展此项研究。首先,我们在溶液和固相研磨反映中研究分别研究了磷脂酰胆碱(PC)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用,确定了以固相研磨的PC/BSA作为质膜-膜蛋白模拟体系。接下来,我们用FTIR光谱探讨了K+、Na+、Ca2+、Mg2+、Eu3+、Tb3+六种金属离子对PC/BSA复合体系的影响。通过对FTIR谱图的分析发现:(1)复合体系中PC的脂肪酸长链在与金属离子作用后排列有序度降低。(2)PC的头部极性基团PO2-受碱金属离子K+、Na+影响非常微弱;而Ca2+、Mg2+、Eu3+、Tb3+离子均体现出与该基团配位结合的特征,碱土金属离子体现出单齿配位的特征而稀土离子则以双齿配位形式与PO2-基团作用。(3)脂羰基的水化程度在不同金属离子的不同浓度下变化各异,金属离子的离子半径、水合热等离子本身具有的性质与该变化密切相关。(4)在对BSA二级结构的影响中,金属离子总的作用是增加了BSA中α螺旋的相对含量,降低了β转角的相对含量。我们的研究结果也提供了不同离子浓度下PC/BSA复合体系的结构变化,对文献报道中存在的对Ca2+离子引起的C=O基团水化报道中的差异做出合理解释,并对Eu3+与PC/BSA中PO2-的配位作用进行了半定量分析,这些结论在以往的红外光谱研究中鲜有讨论。上述结果与FTIR对传统的金属离子与单纯或者混合磷脂的相互作用相比,对体系中脂肪酸长链的相互作用的结论是相悖的,说明体现出体系中存在蛋白质与否对讨论结果有很大影响。同时考虑到生物膜的组成中同时含有蛋白质和脂膜,因此该结论从一个侧面说明了在FTIR光谱用于探讨金属离子对脂膜的影响时,磷脂-蛋白复合体系与磷脂体系相比具有更大的优势。 第二部分:肿瘤组织的FTIR谱学诊断方法 本论文首先从22例冰冻样品的130个红外光谱图中通过数据处理和初步统计学分析,总结了区分癌变和正常直肠组织的5个判别指标:I2873/I2854、I1745/I1643、I1458/I1400、I1240/I1315和I1162/I1082。然后,比较了13例患者的26个离体新鲜直肠组织的FTIR谱图以及5例患者的7个术中在体组织的FTIR谱图与冰冻组织样品的谱图,发现离体和在体组织谱图中存在相对严重的水吸收峰干扰,从而对从冰冻样品中得到的判别指标和判别标准进行修正和调整,在新鲜离体组织和术中在体组织中仍然能够沿用的判别标准分别是:I1745/I1643、I1458/I1400、I1315/I1240、I1162/I1082,以及I1745/I1643、I1458/I1400、I1315/I1240。本论文的研究旨在将区分直肠癌变和正常组织的标准量化,有助于将来判别式的建立和临床应用。但是具有统计学意义上的数据,仍然有待于进一步收集到足够数量的新鲜离体和术中在体组织的FTIR谱图。
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