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本论文分为四部分第一部分文献综述灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Ley-ss.ex Fr.)Karst.或紫芝Ganoderma sinense Zhao,XuetZhang的干燥子实体。性甘、平,归心、肺、肝、肾经,具有补中益气、扶正固本、延年益寿、止咳平喘等功效,用于心神不宁、失眠心悸、肺虚咳喘,虚劳短气、不思饮食等症。本论文共查阅155篇相关文献,对灵芝的化学成分、药理作用及质量控制研究现状进行了综述,归纳了已报道的灵芝三萜类、多糖类、甾体类、脂肪酸类、生物碱类等成分。在药理活性方面,分别总结了灵芝的两大主要活性成分三萜和多糖类的活性,二者均具有抗肿瘤、保肝、抗炎、免疫调节、降血糖和降血脂等多方面的活性,在临床上应用广泛。质量控制方面,目前主要集中在赤芝有效成分的含量测定和药材或部位的指纹图谱研究。第二部分 赤芝子实体化学成分研究采用溶剂法和多种色谱技术(硅胶、C18、Sephadex LH-20、MCI等柱色谱),对赤芝子实体乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位中的Fr.7-18进行化学成分的分离与纯化。利用理化性质和现代波谱分析技术(ESI-MS、IR、13C-NMR、1H-NMR以及ROESY、HMBC、HSQC等2D-NMR)鉴定化合物结构;共分离鉴定了 14个化合物,其中三萜类化合物12个和脑苷酯类化合物2个。鉴定出的三萜类化合物分别为:3β,7β,15α-trihydroxy-11,23-dioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid(化合物1),3β,7β,15β-trihydroxy-11,23-dioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid methyl ester(化合物 2),3β,7α-dihydroxylanosta-8,24-dien-11-one(化合物3),3β,7β,15α,28-tetrahydroxy-11,23-dioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid(化合物4),Ganotropic acid(化合物5),甲基灵芝酸C2(化合物6),GanosineniolA(化合物7),灵芝酸B(化合物8),Ganoderiol H(化合物9),灵芝酸A(化合物10),灵芝酸C(化合物 11),灵芝酸 G(化合物 12);2 个脑苷酯类为(4E,8E)-N-D-2’-hydroxypalmitoyl-1-O-β-D-glucopyranosyl-9-methyl-4,8-spingodienine(化合物 13),Termitomycesphins G(化合物 14)。经文献检索,2个三萜类化合物(化合物1,3)为首次从赤芝子实体中分离得到;1个脑苷酯类化合物(化合物14)为首次从灵芝属中分离得到。本研究丰富了赤芝子实体化学成分内涵,并为赤芝子实体质量控制研究提供物质基础。第三部分赤芝质量控制方法研究建立了 15个不同产地赤芝药材脂溶性成分的HPLC指纹图谱,利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对15个不同产地赤芝药材脂溶性成分的HPLC指纹图谱进行相似度分析,标定出37个共有峰;15批药材的相似度在0.956~0.772之间,其中4批药材的相似度在0.9以上,9批药材的相似度在0.8以上。聚类分析结果显示,15批药材聚为4类,同一省份的不同批次均可聚为一类,表现出产地的一致性。在主成分分析中,提取了 6个主成分,累积贡献率可达93.69%,其中第一主成分的贡献率为43.09%。37个共有峰中对第一主成分贡献率最大的前5个峰分别为10,3,30,9,4号峰,经鉴定化合物的结构为灵芝酸 B、3-acetylganoderenic acid K、3,7-oxo-12-acetylganoderic acid DM、灵芝酸 G、3,7,15-trihydroxy-11,23-dioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid。这 5 个成分的含量对不同产地的赤芝药材的质量影响最大,可能是影响药材聚类结果的主要原因。采用HPLC/MSn对赤芝药材脂溶性成分指纹图谱的共有峰进行定性归属,鉴定了 37个共有峰中的 33 个,分别是:12-hydroxyganoderic C2(色谱峰 1)、3-acetylganoderenic acid K(色谱峰 3)、3,7,15-trihydroxy-11,23-dioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid(色谱峰 4)、灵芝酸 C2(色谱峰 5)、赤灵芝酸 B(色谱峰 6)、3-hydroxy-4,4,14-trimethyl-7,11,15-trioxochol-8-en-24-oic-acid(色谱峰7)、灵芝酸C6(色谱峰8)、灵芝酸G(色谱峰9)、灵芝酸B(色谱峰10)、灵芝酸AM1(色谱峰12)、灵芝酸K(色谱峰13)、赤芝酸A(色谱峰 14)、灵芝酸A(色谱峰 15)、灵芝酸H(色谱峰 16)、12-hydroxy-3,7,11,15,23-pentaoxo-lanost-8-en-26-oic acid(色谱峰17)、12,15-bis(acetyloxy)-3-hydroxy-7,11,23-trioxo-lanost-8-en-26-oic-acid(色谱峰 18)、灵芝酸D(色谱峰19)、灵芝酸F(色谱峰20)、赤灵芝酸D(色谱峰21)、12-acetoxyganoderic acid F(色谱峰22)、灵芝酸J(色谱峰23)、灵芝酸GS或赤灵芝酸E(色谱峰24)、3,7-oxo-12-hydroxy-ganoderic acid DM(色谱峰 25)、3-acetylganoderic acid H(色谱峰 27)、15-hydroxyganoderic acid DM(色谱峰 29)、12-hydroxyganoderic acid D(色谱峰 26)、3,7-oxo-12-acetylganoderic acid DM(色谱峰 30)、赤灵芝酸 A(色谱峰 32)、灵芝酸 DM(色谱峰33)、赤芝酮A(色谱峰34)、灵芝酸TR或灵芝酸Y(色谱峰35)、3,11,15-trioxochol-8-en-24-oic acid(色谱峰 36)、7,15-dihydroxy-4,4,14-trimethyl-3,11-dioxochol-8-en-24-oic acid(色谱峰37);此外,对离子流图中的非共有峰进行定性鉴别,鉴定出 9 个,分别为 3,12-dihydroxy-4,4,14-trimethyl-7,11,15-trioxo-lanost-8,9,20,22-en-26-oic acid(色谱峰al)、灵芝酸Mf(色谱峰a2)赤芝酸N(色谱峰a3)、灵芝烯酸D(色谱峰a4)、灵芝酸E或灵芝酸δ(色谱峰a5)、Elfvingic acid A(色谱峰a6)、灵芝烯酸 B(色谱峰 a7)、赤芝酸 D(色谱峰a8)、赤芝酸 GS-3 或3,15-diacetoxylanosta-8,24-dien-26-oic acid(色谱峰a9),对指纹图谱中的共有峰进行定性归属,可为不同产地的赤芝药材的质量控制提供依据。首次建立了 HPLC 法测定赤芝药材中灵芝酸 A、B、G、3β,7β,15α-trihydroxy-11,23-dioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid(GS8)4 种灵芝酸的含量,并测定和比较了 15个不同产地赤芝药材中4种灵芝酸的含量。灵芝酸A、B、G、GS8的回归方程分别为:Y=972162 X-51942(r=0.9992)、Y=836496 X-2621.6(r=0.9991)、Y=834617 X-3224.8(r=0.9992)、Y=688859 X+6086.6(r=0.9993),线性范围分别为0.1575~2.6563 ug、0.0891~1.485 ug、0.1041~1.735 ug、0.1509~2.515 ug,灵芝酸 A、B、G、GS8 的加样回收率分别为 101.68%,105.10%,100.24%,99.2%,RSD 值分别为2.10%,2.49%,3.72%,2.89%。15批赤芝药材中灵芝酸A、B、G、GS8的含量测定结果表明,该方法简便、快捷、快速、可靠且重现性好,可作为赤芝药材中灵芝酸A、B、G、GS8的含量测定方法。第四部分 总结与讨论1、从赤芝子实体乙酸乙酯部位分离得到14个化合物,其中2个三萜类化合物为首次从赤芝子实体中分离得到,1个脑苷酯类化合物为首次从灵芝属中分离得到。2、建立了 15个不同产地赤芝药材脂溶性成分HPLC指纹图谱,并对其进行相似度评价、聚类分析与主成分分析;利用液质联用技术对15个不同产地赤芝药材脂溶性成分指纹图谱的共有峰进行定性归属,归属37个共有峰中的33个。3、首次建立了 HPLC 法赤芝药材中灵芝酸 A、B、G、3β,7β,15α-trihydroxy-11,23-dioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid(GS8)4 种灵芝酸含量,并对15个不同产地赤芝药材中4种灵芝酸含量进行了测定与比较,为不同产地赤芝药材的质量控制提供依据。4、本课题以赤芝子实体为研究对象,对其进行化学成分分离和质量控制方法的研究,主要是以三萜类为指标化合物,但赤芝药材中药理活性成分不仅是三萜类化合物,还包括多糖及其它类化合物,要想实现对赤芝药材的全面评价和认识,还需对其它药效成分进行研究。