类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种慢性全身炎症性疾病，以外周关节持续性和进行性滑膜炎，继而引起不同程度软骨破坏和骨侵蚀，造成关节畸形和强直为主要临床表现，属于自身免疫性疾病，70%~80%患者最终可发展成不同程度的功能障碍，甚至残疾。目前我国RA患者人数多达400多万，是目前造成我国人民丧失劳动力主要原因之一。RA的病因及发病机制尚不明确，感染、环境、遗传和免疫等因素共同发挥作用。近些年随着免疫学的进展发现：CD4+T细胞中的Th1/Th2亚群参与RA免疫应答的各个阶段，在RA发病机制及疾病进程中起重要作用，但报道的结果却不尽相同。目的:通过建立胶原蛋白诱导性关节炎（collagen-induced arthritis，CIA）小鼠模型观察Thl和Th2细胞亚群在CIA整个病程演变中的动态变化，深入探讨Th1/Th2细胞及其分泌的细胞因子在RA致病机制中的意义，为RA的治疗提供一定的理论依据。方法：1分两批购买SPF级雄性DBA1/J小鼠，每批90只，其中42只为正常对照组，其余48只建立CIA模型。每批按随机数字表法随机分7个时间点（初次免疫后第7天、14天、21天、28天、35天、42天、56天），每个时间点再按随机数字表法分正常对照组6只，CIA模型组6只。2每个时间点常规无菌摘眼球取血分离血清，Flowcytomix法检测血清中Th1型细胞因子（IFN-γ、TNF-α、IL-2）和Th2型细胞因子（IL-4、IL-5、IL-6）水平。3每个时间点常规无菌摘眼球取血后处死小鼠，解剖取出脾脏制备成单细胞悬液，应用流式细胞术检测小鼠脾脏Th1、Th2细胞数量。4每个时间点常规无菌摘眼球取血后处死小鼠，解剖取出脾脏制备成单细胞悬液，应用实时荧光定量PCR技术检测Th1细胞特异性基因T-bet和Th2细胞特异性基因GATA的表达水平。5采用SPSS17.0软件包进行统计分析。所有数据均以均数±标准差（x±S）表示，两两比较用t检验。以α=0.05为显著性检验水准。结果：1流式细胞术检测Th1、Th2细胞与同期正常对照组比较，CIA小鼠脾脏Th1细胞百分率在初次免疫后第7天和第14天均明显增高（P＜0.01），第21天与正常组无显著性差异（P＞0.05），第28天Th1细胞百分率又显著升高（P＜0.01），第35天Th1细胞百分率降低到正常组水平（P＞0.05），第42天Th1细胞百分率继续降低，与正常组比较有显著性差异（P＜0.01），第56天Th1细胞百分率与正常组无显著性差异（P＞0.05）。与同期正常对照组比较，CIA小鼠脾脏Th2细胞百分率在初次免疫后第7天和第14天均高于正常组（P＜0.01），第21天和第28天与正常对照组比较无明显差异（P＞0.05），第35天和第42天Th2细胞百分率有升高趋势，均明显高于正常对照组水平（P＜0.01），而到第56天降低到正常对照组水平（P＞0.05）。2实时荧光定量PCR检测Th1细胞特异转录因子T-bet和Th2细胞特异转录因子GATA的基因表达。与同期正常对照组比较，CIA小鼠脾脏在初次免疫后第7天和第14天T-bet表达水平均明显增高（P＜0.05），而第21天T-bet表达水平下降与正常组无显著性差异（P＞0.05），第28天T-bet表达水平又开始升高（P＜0.05），初免第35天T-bet表达水平与正常组比较无显著性差异（P＞0.05），第42天T-bet表达水平开始下降（P＜0.05），第56天T-bet表达水平与正常组无显著性差异（P＞0.05）。与同期正常对照组比较，CIA小鼠脾脏在初次免疫后第7天GATA表达水平与正常对照组无明显区别（P＞0.05），至第14天GATA表达开始增高（P＜0.05），第21天和第28天GATA表达下降至正常水平（P＞0.05），而初次免疫第35天、第42天和56天GATA表达有上升趋势，与正常组比较差异显著（P＜0.05）。3Th1、Th2细胞型因子的动态观察3.1Th1型因子的动态观察CIA模型组小鼠血清IFN-γ水平在初次免疫后第7天与正常组比较无统计学意义（P＞0.05)，第14天明显高于正常对照组（P＜0.01），第21天与正常组比较无统计学意义（P＞0.05），至初次免疫第28天IFN-γ水平达最高峰，显著高于正常组（P＜0.01），而第35天IFN-γ水平虽有所下降，但仍高于正常组（P＜0.05），第42天和56天逐渐下降到正常组水平（P＞0.05）。CIA模型组小鼠血清TNF-α水平在初次免疫后第7天、14天升高明显，与正常对照组比较有统计学意义（P＜0.05），第21天与正常对照组比较无统计学意义（P＞0.05），至初次免疫后第28天和35天TNF-α明显升高（P＜0.05），尤其28天上升更为显著（P＜0.01），初次免疫后第42天和56天TNF-α与正常对照组比较无统计学意义（P＞0.05）。3.2Th2细胞型因子的动态观察CIA模型组小鼠血清IL-4水平在初次免疫后第7天、14天均高于正常组且差异有统计学意义（P＜0.05），第21天下降至正常组水平（P＞0.05），初免后第28天IL-4显著高于正常组水平（P＜0.01），至第35天、42天和56天与正常组比较均无统计学意义（P＞0.05）。CIA模型组小鼠血清IL-5只在初次免疫后第7天明显高于正常对照组水平且差异有统计学意义（P＜0.05），但第14天、21天、35天、42天和56天与正常对照组比较均无统计学意义（P＞0.05）。结论:1CD4+Th1/Th2细胞及其细胞因子参与CIA整个病程的演变，且在不同的阶段呈现不同的变化规律，其平衡状态的改变与疾病的活动程度密切相关。2检测Th1/Th2型细胞及其分泌的细胞因子有助于判断RA患者的病情进展情况。