珙桐(Davidia involucrata Baill.)为珙桐科珙桐属落叶乔木,第三纪古热带植物孑遗种,我国特有的珍稀植物,国家I级重点保护濒危物种,具有极高的观赏价值和学术研究价值。本研究从珙桐果实及种子转录组数据库中筛选到一个编码调控原花青素生物合成的MYB转录因子的基因DiMYB1,对其进行了克隆及功能分析。主要研究结果如下:1.珙桐DiMYB1基因的克隆及生物信息学分析。根据珙桐果实及种子转录组数据库中该基因的ORF序列设计特异引物,以珙桐败育种子的cDNA为模板进行RCR扩增得到全长序列,并在GenBank上登录,登录号为KR996175。利用在线软件对该基因序列进行了生物信息学分析。2.DiYB1基因的表达模式。①DiMYB1基因在珙桐芽、叶片、苞片、果肉、种子中的表达量qPCR分析。结果表明,DiMYB1基因在紫色幼叶中的表达量最高,其次是雄蕊,在芽、茎、成熟叶片、苞片、果肉和种子中微量表达。②DiMYB1基因在正常和败育种子中的表达模式。qPCR分析结果表明,D/MYB1基因在败育种子中的表达量显著高于正常种子,且在中期败育种子中的表达量达到最高。③DiMYB/基因在不同颜色叶片中的表达。DiMYB1基因在紫色叶片中的相对表达量最高,其次是中间色(介于紫色和淡黄绿色之间)叶片,在绿色叶片中表达量较低。3.珙桐DiMYB1基因的原核表达。构建原核表达载体pET28a(+)-DiMYB1,高效表达蛋白质,采用His标签纯化蛋白,DiMYB1蛋白以包涵体的形式存在。4.珙桐DiMYB1基因功能在拟南芥中的初步验证。构建植物超量表达载体pBI-121-DiMYB1,重组转化农杆菌菌株GV3101,采用花序浸染法转化拟南芥花序,收获种子后,通过抗性培养筛选阳性植株,自交繁殖2代后得到T2代转基因植株。与野生型拟南芥相比,DiMYB1超量表达植株的主要表型差异表现在:大部分幼苗叶片颜色变紫;多数幼苗叶片的形态和数目发生了明显变化,有的叶片出现了白化现象;少数成熟豆荚颜色变紫;有的豆荚不饱满,种子有皱缩现象;植株矮小,茎秆细长,提前进入生殖生长。后续将筛选纯合子转基因植株,验证珙桐DiMB1基因的功能。