论文部分内容阅读
伴随着社会经济的发展,猫、狗等伴侣动物的寿命明显延长,而年龄依赖性的血栓逐渐成为老年伴侣动物的“杀手”,但当前尚未开发出宠物专用的抗血栓药物。阿司匹林丁香酚酯（Aspirin eugenol ester,AEE）是自主合成的一种解热、镇痛、消炎药,研究证实其也具有显著的抗血栓作用。本研究通过研究AEE对肺栓塞小鼠的保护作用及其在大鼠血瘀模型中的抗血栓作用,进一步确证AEE对不同模型的抗血栓作用;基于血小板聚集被证实为血栓形成的关键因素,拟探讨对AEE的抗血小板聚集机制。1.使用盐酸肾上腺素和胶原诱导小鼠肺部形成血栓,制备小鼠肺栓塞模型。通过苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosin staining,HE）染色的组织切片显示肺栓塞小鼠肺部存在明显的血栓形成,伴随着肺泡壁毛细血管充血、水肿,证明小鼠肺栓塞模型成功制备。AEE能够一定程度地升高肺栓塞小鼠存活率,并显著降低肺栓塞小鼠肺系数。结果表明,AEE对肺栓塞小鼠具有一定的保护作用。2.通过肾上腺素和冰水制备出大鼠血瘀模型,AEE能够显著升高血瘀大鼠血液中的凝血酶原时间、部分活化凝血活酶时间、凝血酶时间、血小板数目及血小板在血液中的百分比,并显著降低血液中的纤维蛋白原含量;AEE能够显著降低血瘀大鼠血液的全血粘度、血浆粘度,降低血浆中血栓素B2（thromboxane B2,TXB2）含量,升高血浆中6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)含量。结果说明,AEE在血瘀模型中有着良好的抗血栓作用。3.体外从健康大鼠血液中提取血小板,通过血小板激动剂诱导血小板聚集,研究AEE抗血小板聚集的作用机制。AEE对血小板中乳酸脱氢酶（LDH）含量无显著影响,且AEE的抗血小板聚集作用与其对血小板的毒性无关;AEE能够显著降低血小板ATP和钙离子释放及P选择素（P-selectin）表达,抑制胞内CD40L蛋白、蛋白激酶B（Akt）、细胞外调节蛋白激酶2（ERK2）和应激活化蛋白激酶1（JNK1）的表达,恢复Sirt 1蛋白的表达,但对p38蛋白、丝氨酸157位点磷酸化的血管舒张剂激活磷蛋白(VASPSer157)和丝氨酸239位点磷酸化的血管舒张剂激活磷蛋白(VASPSer239)的表达以及胞内环磷酸腺苷（Cyclic Adenosine monophosphate,cAMP）及胞内环磷酸鸟苷（cyclic guanosinc monophosphate,cGMP）含量无影响。结果表明,AEE通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）、丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）、Sirt 1/CD40L通路抑制血小板聚集,这一过程与cAMP介导的VASP磷酸化无关;AEE对小鼠出血时间无显著影响,说明AEE的抗血小板聚集过程并不伴随着出血风险。综上所述,AEE具有显著的抗血栓活性,该活性与其对血小板中PI3K/Akt,MAPK和Sirt1/CD40L通路的抑制作用有很大关系。