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生物有机肥(Bio-organic fertilizer,BOF)是一类兼具微生物肥料和有机肥效应的新型肥料,是可持续农业的重要生产资料。然而,目前我国生物有机肥产业尚处于起步阶段,基础研究薄弱,市场上BOF产品质量良莠不齐问题十分突出。BOF品质的高低决定于其所含的功能菌数量及活性。因此,研究探讨BOF制备、加工和贮存工艺对功能菌数量的影响机制对于提高其品质至关重要。为此,本文以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)F2为功能菌,在对液体培养基进行优化以提高F2活菌密度的基础上,采用平板计数并结合分子生物学手段,研究了二次发酵和吸附制备法、加工工艺及包装方式等对BOF中功能菌数量和微生物群落结构的影响,并通过草莓盆栽试验探讨了BOF的促生作用,取得主要结果如下:1.菌株F2的摇瓶培养对比试验表明,浓缩味精废液(CMGW)的80倍水稀释液(即CMGW培养基)优于肉汤(NB)培养基;为进一步提高菌液的F2活菌密度,通过正交试验对CMGW培养基各类养分进行优化,结果表明在其基础上添加牛肉膏 1.0g/L、蛋白胨4.0g/L、MnSO4·2H20 0.5g/L、H3BO3 0.02 g/L、FeSO4·7H2O 0.1 g//L、MgSO4·7H2O 0.5g/L所培养的F2菌悬液活菌密度分别为CMGW和NB培养基的2.9倍和6.3倍。2.正交设计的二次发酵试验表明,1%接种量和添加CMGW可提高二次发酵后BOF中功能菌F2的芽孢数;添加CMGW和桑枝屑,并调节含水率至60%可促进物料升温并缓解BOF的pH偏高。3.通过CMGW添加与否的二次发酵对比试验发现CMGW作为营养助剂能显著促进F2在BOF中的增殖并提高其优势地位。变性梯度凝胶电泳和illumine-MiSeq测序分析显示,二次发酵前后BOF的微生物群落结构变化明显,添加CMGW可提高BOF的种群丰富度并使其微生物群落结构更稳定。4.包装方式对比试验结果显示,吸附法制备的BOF采用塑料自封袋包装经7m(月)贮存,其F2活菌数显著高于真空包装,且F2活菌丰度的变异系数更小。5.烘干工艺试验结果表明,适当提高烘干温度并缩短烘干时间有利于提高吸附法制备的BOF贮存7m后的F2活菌数、芽孢数及其在贮存中的稳定性。6.对吸附法制备的BOF进行化肥添加试验,结果表明,添加尿素至BOF含氮量为5%时F2数量显著提高,但含氮量≥7.5%时F2数量显著降低;添加尿素会加剧BOF在贮存中的N素损失,并导致BOF的pH偏高、发芽指数下降。7.草莓盆栽试验结果表明,施用以F2为功能菌的BOF能显著提高草莓的生物量和N、P、K含量及积累量;平板计数和T-rflp检测证明F2在草莓根际定殖;BOF处理的根际微生物群落结构与有机肥(OF)处理差异明显,其丰富度指数、均匀度指数和多样性指数均显著低于OF。