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板栗疫病菌(Cryphonectraa paraitica)是引起毁灭性板栗疫病的病原真菌。板栗疫病菌低毒病毒(Cryphonectriahypovirus1,CHV1)是专性寄生于板栗疫病菌胞质中的一类正链RNA病毒。用紫外照射方法诱变板栗疫病菌携带有低毒病毒的转基因工程菌株CN2,获得了不支持病毒复制的突变菌株UV57。UV57生长速度缓慢,不耐干燥,气生菌丝比较少,产少量的橘黄色素,无子实体,不产生分生孢子,致病力显著降低。用双向电泳方法比较突变体UV57与野生型菌株EP155的总蛋白表达谱,表达差异2.0倍以上的蛋白点共83个,其中上调蛋白点35个,下调48个。用质谱方法成功鉴定了其中72个蛋白点,这些差异表达的蛋白质主要参与了能量代谢、甲基化代谢、氨基酸代谢、柠檬酸循环、丙酮酸代谢和MAPK(促分裂原活化蛋白激酶)信号传导等途径。一些线粒体蛋白也出现差异表达。在突变体UV57中,由prb1基因编码的类枯草杆菌蛋白酶PRB1(Subtilisin-like protease B)的表达下调了 2倍,qRT-PCR检测结果显示其转录累积水平下调4.38倍。构建了 prb1基因缺失突变体Δprb1。通过菌丝融合方法,得到EP713与prbl基因缺失突变体Δprbl的融合菌株EP713/Δprl。dsRNA病毒的提取和RNA电泳结果显示,EP713/Aprb1菌株支持CHV1-EP713病毒复制,但病毒累积量下降,初步显示prb1可能是低毒病毒复制或维持相关的基因。sahh基因编码S-腺苷高半胱氨酸水解酶(S-adenosylhomocysteine hydrolase,SAHH)。受低毒病毒感染后,sahh的转录水平呈上调。用原核表达制备了 SAHH重组蛋白,体外试验表明该蛋白具备SAHH酶活性,对S-腺苷高半胱氨酸(S-Adenosylhomocysteine,SAH)的水解活性表现km值为15.6 μM和Vmax值为0.25 μmol/min/mg。构建了sahh基因缺失突变体Asahh。SPE-HPLC检测发现Δsahh细胞内的SAH及其前体S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)累积,而腺苷(Adenosine,ADO)减少,SAH/SAM比值明显增加,参与甲基化作用途径的关键基因ak、ado和omt(分别编码腺苷激酶、甲硫氨酸腺苷转移酶和氧位甲基转移酶)转录累积水平均显著上调。Δsahh生长速度缓慢、气生菌丝显著减少,不产生桔黄色素,不能形成子实体和分生孢子,致病力显著下降。sahh基因的缺失使致病基因cyp1(编码亲环胞霉素)和参与G蛋白信号传导途径的cpga1、cpgb1、cpgc1和ste12(分别编码Ga、Gβ、Gγ和Ste12蛋白)基因转录累积水平均显著下调。综合上述结果,在板栗疫病菌中,SAHH可能是通过调节细胞内的甲基代谢作用从而影响其他生物学过程,包括G蛋白信号传导途径,从而影响致病性。