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研究目的:
云南灯盏花素是从天然植物灯盏花中提取的黄酮类有效成分,临床主要用于心脑血管疾病。近几年在糖尿病视网膜病中的应用也受到广泛关注,而临床应用中不良反应时常发生,由于病变复杂和其作用的多靶点,作用机制目前还不明确,由此引发的药物纠纷也成为法医工作者的难题。
本研究以高糖、低氧及高糖低氧联合模拟糖尿病视网膜病变内环境,观察灯盏花素在此环境中对体外培养人视网膜血管内皮细胞(human retinal endothelial cells,HREC)的影响及对VEGF的作用,并进一步探讨灯盏花素可能的作用机制。
探索灯盏花素类似化合物对人视网膜血管内皮细胞的影响,为涉及到此方面的法医病理学及法医临床学诊断提供药理学基础.
研究方法:
采用CCK-8检测HREC在高糖,低氧,高糖低氧联合和正常糖处理条件下的增殖情况及灯盏花素对HREC增殖作用的影响,甘露醇作为渗透压对照,氯化钴(150umol/L)模拟低氧条件;免疫印记(Western blot)检测不同处理条件下VEGF蛋白的表达情况;酶联免疫吸附(ELISA)检测各组培养液上清中VEGF蛋白含量。研究结果:
1.中高糖和低氧可明显促进人视网膜血管内皮细胞增殖(P<0.05),但单独高糖(30mmol/L)条件下未见明显的增殖。
2.高糖低氧联合培养诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖与高糖或低氧独立因素诱导增殖相比,没有显著差异(P<0.05)。
3.高糖和低氧诱导人视网膜血管内皮细胞VEGF蛋白表达增加(P<0.05)。
4.不同浓度灯盏花素(1×10-11~1×10-5mol/L)处理HREC48 h,细胞存活率分别为99.38±7.85%,98.87±8.8%,99.62±5.35%,99.69±4.66%;处理72 h,细胞的存活率分别为99.02±6.44%,99.16±6.15%,97.57±6.26%,104.00±4.29%,提示灯盏花素对内皮细胞增殖的影响不明显。
5.灯盏花素对中高糖,低氧诱导的细胞增殖有显著的抑制作用(P<0.05),但浓度依赖作用不明显。
6.在高糖和低氧条件下,灯盏花素对人视网膜血管内皮细胞VEGF的表达有显著的抑制作用(P<0.05)。
研究结论:
1.中高糖和低氧刺激是视网膜血管内皮细胞增殖的有效因素,高糖和低氧联合培养,对细胞增殖没有叠加效应。 2.灯盏花素(1×10-11~1×10-5mol/L)对正常糖培养的人视网膜血管内皮细胞活性没有影响。
3.灯盏花素能够明显抑制中高糖和低氧诱导的细胞增殖,其可能作用机制与其抑制VEGF表达有关。
4.本研究为涉及到灯盏花素在糖尿病治疗中的药物纠纷鉴定从药理学角度提供了理论基础。