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目的:1.检测人类骨髓微环境中间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)趋化因子CXCL13的分泌水平。2.研究人类MSCs通过分泌趋化因子CXCL13对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞系U266和LP-1侵袭、耐药及增殖作用的影响。3.探讨人类MSCs通过分泌趋化因子CXCL13调节MM细胞系U266和LP-1侵袭、耐药及增殖作用的相关机制。方法:1.收集MM患者及正常人的骨髓标本,提取并培养骨髓中的MSCs,通过流式细胞技术对其进行表型鉴定;2.于中国科学院(上海细胞库)购买MM细胞系U266和LP-1;3.酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测MM患者及正常人骨髓MSCs培养上清液中趋化因子CXCL13的分泌水平;4.Western blot检测MM细胞系U266和LP-1中趋化因子CXCL13特异性受体CXCR5的蛋白表达水平;5.在体外利用MM患者的MSCs与MM细胞系U266和LP-1建立共培养模型,为进行后续实验操作做前期准备;6.Cell Counting Kit-8(CCK8)方法检测MSCs对MM细胞系U266和LP-1硼替佐米耐药功能的影响;7.Transwell方法检测MSCs对MM细胞系U266和LP-1侵袭能力的影响。8.CCK8方法检测MSCs对MM细胞系U266和LP-1增殖能力的影响。9.RT-PCR方法检测MSCs对MM细胞系U266和LP-1中btk、NF-κB、bcl-2及mdr-1 mRNA表达水平的影响;10.Western blot方法检测MSCs对MM细胞系U266和LP-1中BTK、NF-κB、BCL-2及MDR-1蛋白表达水平的影响。结果:1.人类骨髓微环境中的MSCs贴壁生长,细胞形态呈大小均一的梭型,类似成纤维细胞。流式细胞技术表型鉴定结果显示CD105、CD73及CD90等阳性表达率为95%以上,而CD45、CD34或CD11b、HLA-DR等的阳性表达率不足3%;2.ELISA方法检测结果显示人类骨髓微环境中的MSCs能够分泌趋化因子CXCL13,且MM患者的分泌水平明显高于正常人;3.Western blot检测结果显示MM细胞系U266和LP-1均可表达趋化因子CXCL13的特异性受体CXCR5;4.CCK8检测结果显示人类骨髓微环境中的MSCs能够通过分泌趋化因子CXCL13增强MM细胞系U266和LP-1对硼替佐米的耐药作用;5.Transwell检测结果显示人类骨髓微环境中的MSCs能够通过分泌趋化因子CXCL13促进MM细胞系U266和LP-1的侵袭作用;6.CCK8检测结果显示人类骨髓微环境中的MSCs能够通过分泌趋化因子CXCL13促进MM细胞系U266和LP-1的增殖作用;7.RT-PCR结果显示人类骨髓微环境中的MSCs能够通过分泌趋化因子CXCL13上调MM细胞系U266和LP-1中btk、NF-κB、bcl-2及mdr-1 mRNA的表达水平;8.Western blot结果显示人类骨髓微环境中的MSCs能够通过分泌趋化因子CXCL13上调MM细胞系U266和LP-1中BTK、NF-κB、BCL-2及MDR-1蛋白的表达水平。结论:MM的发病机制复杂多样,涉及多种细胞因子及多条信号通路的异常。我们的实验研究发现MM患者骨髓微环境中的MSCs能够高水平表达趋化因子CXCL13,且可通过CXCL13介导的信号通路影响MM细胞系U266和LP-1的侵袭、耐药及增殖等多种基本的生物学功能,进一步的研究发现CXCL13介导的信号通路能够上调MM细胞系U266和LP-1内BTK、NF-κB、BCL-2及MDR-1的mRNA及蛋白表达水平。向共培养体系中加入趋化因子CXCL13的拮抗剂anti-CXCL13后,MM细胞系U266和LP-1基本的生物学功能明显减弱。因此我们认为该研究有望为MM的更深层次治疗提供新的思路和方向。