蛤蟆油及其伪品的生物活性及安全评价

来源 :长春中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ysksy
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目的:1、通过建立去势雌性大鼠模型对比食用蛤蟆油(RO)正品与伪品对老年大鼠体内与安全性相关指标的影响。2、研究RO所含雌激素(E2)成分是否会对E2依赖性人乳腺癌细胞产生影响。  方法:1、采用雌性wistar大鼠50只,通过去势造模老年雌性大鼠,随机分为空白组(Control)、模型组(Model)、蛤蟆油组(RO)、青蛙油组(FO)、蟾蜍油组(TO),灌胃给药60d后,腹主动脉取血检测大鼠的凝血功能、血常规、激素6项;利用蛋白质免疫印迹法、荧光实时定量PCR法检测大鼠脑组织细胞凋亡通路的相关因子、肿瘤标志物的表达水平。2、对人乳腺癌细胞系MCF-7给药空白血清、E2含药血清和RO含药血清,MTT和流式细胞术检测给药24h后肿瘤细胞的增殖率和凋亡率,划痕实验检测给药24h后肿瘤细胞的横向迁移能力,Transwell迁移实验检测给药24h后肿瘤细胞的纵向迁移能力,Transwell侵袭实验检测给药24h后肿瘤细胞的侵袭能力。  结果:1、体内实验,RO可明显升高PT、APTT、TT,降低血液中FIB的含量;FO可明显降低PT、APTT、TT; TO可明显降低TT,升高FIB的含量。RO可明显升高RBC、HGB、MCHC、MPV、WBC、LY,可明显降低PLT、PDW; FO可明显升高PDW、MPV、NEUT,可明显降低MCHC; TO可明显升高PLT、、MPV、MONO、NEUT,明显降低HGB、MCHC。RO可明显增加血液中P、T、E2的含量,降低FSH、LH的含量;FO可明显降低P、T、E2、LH的含量;TO可明显降低P、E2、PRL的含量。RO、FO、TO三组的PI3K、AKT的蛋白含量明显升高,其中RO组PI3K、AKT的含量多于FO和TO两组;RO、FO、TO三组ERK的含量明显升高,其中RO组ERK的含量多于FO和TO两组;RO、FO、TO三组的GSK-3β的含量明显降低,其中RO组GSK-3β的蛋白含量稍少于FO和TO两组;RO、FO、TO三组bcl-2的含量明显升高,其中RO组bcl-2蛋白含量多于FO和TO两组,RO、FO组bax的蛋白含量明显降低,其中RO组bax的蛋白含量少于FO组。RO、FO、TO三组的PI3K mRNA的相对表达量升高,其中RO组的PI3K mRNA的相对表达量最多,RO、FO、TO三组的AKT mRNA的相对表达量升高,其中RO组的AKT mRNA的相对表达量最多;RO、FO、TO三组的ERK mRNA的相对表达量升高,其中RO组的ERK mRNA的相对表达量最多;RO、FO、TO三组的GSK-3β mRNA的相对表达量升高,其中RO组的GSK-3β mRNA的相对表达量最多;RO、FO、TO三组的bcl-2 mRNA的相对表达量降低,其中RO组的bcl-2 mRNA的相对表达量最少,RO、FO、TO三组的baxmRNA的相对表达量降低,其中RO组的baxmRNA的相对表达量最少。RO、FO组CEA的蛋白含量明显降低,其中RO组CEA的含量少于FO组,RO组AFP的蛋白含量明显减少,FO组AFP的含量明显增多。2、体外实验,MTT的结果显示RO高、中剂量组的OD值明显小于E2组;流式细胞术的结果显示E2组的细胞凋亡率远少于Control组和RO组;划痕实验的结果显示E2组的划痕距离明显小于Control组和RO组的划痕距离;迁移实验的结果显示E2组作用下的细胞迁移到下室的数量明显多于Control组和RO组的细胞数;侵袭实验结果显示E2组作用下的细胞迁移到下室的数量显著多于Control组和RO组的细胞数。  结论:体内实验的结果表明RO具有延长老年大鼠血液的凝血时间和减少血小板含量的作用,提示RO可降低和改善老年人血栓和脑缺血的几率,而伪品不具有此种功效;RO可增多老年雌性大鼠血清里的T、P、E2含量,降低FSH、LH的含量,提示RO可改善处于绝经期的女性因卵巢的功能衰退导致血液中E2、P的水平下降,从而导致下丘脑-垂体-卵巢轴之间的平衡失调;RO可通过凋亡相关通路产生抑制正常脑细胞的凋亡和促进正常脑细胞增殖的作用,提示RO具有延缓衰老、保持青春的功效,而伪品没有此种作用。体外实验的结果表明RO里E2成分的含量保持在一个安全的范围内,不存在促进E2依赖性肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭的作用。
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