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异种体细胞核移植研究对于濒危野生动物保护，细胞内核质互作关系揭示以及医学上“治疗性克隆”具有重要意义。但是，种间核质重构胚胎附植前后发育潜能低，尤其是着床后的胚胎丧失是异种克隆基础研究，甚至获得异种克隆个体的瓶颈问题。本试验对于此问题进行了探索，以去核山羊卵母细胞为胞质受体，构建喜马拉雅塔尔羊异种重构胚，研究了其附植前后的发育能力，并探讨了山羊四倍体胚胎对于塔尔羊异种重构胚胎胚外组织代偿的可能性。
1、从上海动物园采集了雄性喜马拉雅塔尔羊耳部组织，常规组织培养法成功获得塔尔羊耳成纤维细胞系，长期培养细胞仍具有良好的形态和正常的染色体核型(60，XY)。采用血清饥饿48h和细胞汇合24h处理细胞，可以显著提高塔尔羊细胞G0/G1期比例。
2、把塔尔羊耳成纤维细胞移入去核奶山羊卵母细胞卵周隙，电融合法构建异种间核质重构胚，激活后培养6.5天重构胚胎发育至囊胚。山羊输卵管内活体培养的异种重构胚的囊胚发育率(16.67％)明显高于体外培养组(4.66％)(P＜0.01)。经过血清饥饿48h，汇合24h两种方法处理供核细胞所获得的异种重构胚的桑椹/囊胚发育率相似(27.27％VS28.21％，P＞0.05)。塔尔羊-奶山羊异种重构胚的卵裂率与奶山羊-奶山羊重构胚基本一致(86.64％VS85.19％)，但是其桑椹/囊胚发育率存在差异(30.36％VS44.44％，P＜0.05)。
3、塔尔羊异种重构胚的Y染色体核型分析以及SRY基因扩增，鉴定基因组的遗传物质来自雄性塔尔羊细胞。通过位点特异巢式PCR分析异种重构胚的线粒体组成，结果表明在囊胚阶段重构胚线粒体以奶山羊线粒体为主，塔尔羊线粒体少量存在，所占比例＜0.1％。
4、将55枚塔尔羊异种重构囊胚移至17只奶山羊受体子宫内，胚龄30天B超检测到3个孕囊存在，妊娠率为17.65％，但是胚龄45天再次检测时已经无孕囊存在。剖检受体子宫发现塔尔羊异种重构胚在奶山羊子宫内终止妊娠时间大约在胚龄35天左右。
5、优化电融合参数后，以DC0.8Kv/cm，40us，3次刺激山羊2-细胞期胚胎可以获得高的融合率(80.08％)和四倍体胚胎发育率。山羊输卵管内活体培养，四倍体胚胎的囊胚发育率明显高于体外培养组(45.16％VS3.33％.P＜0.01)。细胞组织学分析，83.3％的融合后发育的囊胚具有四倍体核型(4N=120)，但是其细胞数目仅为(53.3±2.8)，约为山羊二倍体囊胚的一半(116.0±4.9)。山羊四倍体囊胚移植到山羊受体子宫内可以正常着床，其胚胎发育异常，但是胎膜部分发育正常。
6、在含有180ng/mlPHA的mKSOM培养液中，通过玻璃针挤压法将去除透明带的8-细胞期塔尔羊异种重构胚和4-细胞期山羊四倍体胚胎聚合，微孔内培养24h后聚合成“单胚胎”，3.5天后发育至囊胚。通过囊胚透射电镜分析塔尔羊异种重构胚胎细胞与山羊四倍体胚胎细胞在聚合囊胚中，并不混杂，四倍体细胞主要分布在囊胚的滋养层部分，而异种重构胚胎细胞则在内细胞团和滋养层都由分布，并且初步判定2N-4N细胞间存在间隙样细胞连接。塔尔羊异种重构胚-奶山羊四倍体胚胎聚合后发育的嵌合体囊胚移植到奶山羊受体子宫内，发现受体子宫出现妊娠反应，尽管剖检发现胚胎在着床后发育早期即发生退化。