前列腺癌是欧美国家中老年男性常见的恶性肿瘤,在我国其发病率亦呈逐年增高趋势,前列腺腺癌是前列腺恶性肿瘤的最常见病理类型,内分泌治疗是前列腺腺癌治疗的最常见方法,适合于临床各期的前列腺癌。去势抵抗性前列腺癌是前列腺癌去势治疗后出现的一个临床阶段,几乎见于所有的内分泌治疗患者,该阶段患者对去势治疗反应差,出现PSA持续升高。PSA的升高与雄激素水平无关,这个阶段的雄激素水平仍为去势水平,甚至出现停药后PSA反而下降的情况。目前的基础研究结果仅能解释内分泌治疗初期阶段(又称蜜月期)的相关机制。根据部分细胞及动物实验结果、临床流行病学和临床病理生理现象,内分泌治疗去势后的前列腺癌细胞,无论是通过补充雄激素(中断雄激素剥夺治疗)、"knock-in’’雄激素受体,其本质都是再次激活雄激索-雄激素受体信号转导通路,以延缓激素难治性前列腺癌(HRPC)发生。LNCaP细胞是来源于前列腺癌淋巴结转移的细胞系,在去势水平的培养基长期传代可以获得去势抵抗性前列腺癌的特征。鉴于上述提示，我们用生理浓度双氢睾酮刺激经诱导的去势抵抗性前列腺癌LNCaP细胞系,发现双氢睾酮能抑制LNCaP细胞生长、增殖、活力,促进细胞凋亡,并发现MAPK信号转导通路的Src-MEK-1/2-ERK-1/2表达下调,同时出现PSA先降后升的现象。上述结果提示去势抵抗性前列腺癌发生后,生理浓度的雄激素能延缓去势治疗后前列腺癌的进展,甚至可能发生前列腺癌临床特征逆转,恢复激素依赖性前列腺癌的临床特征；而后者属于前列腺癌内分泌治疗前的初始状态,对目前的去势和／或抗雄治疗有效,可以继续给予去势和／或抗雄治疗。若能够实现去势抵抗和激素依赖两行特性间的反复转变,则前列腺癌进展受到抑制,可以实现延缓疾病,延长患者生存期及改善生活质量。膀胱癌是一种临床发病率较高的恶性肿瘤,其发病率在全世界排名第九,在我国泌尿系统肿瘤中排名第一,大约每年有356,000例(男性274,000例,女性83,000例)患者罹患膀胱癌,2007年统计显示其在中国城市男性膀胱癌的年龄标准死亡率为3.54／100,000,女性为1.19／100,000,其在农村的比率分别为1.92／100,000和0.52／100,000,发病率有逐年上升的趋势。约70-85%的膀胱癌患者发现时归属浅表型膀胱癌,可以通过经尿道膀胱肿瘤电切术(TURBT)治疗。然而,肿瘤切除术后膀胱癌的复发率相当高。泌尿外科诊疗指南建议应用膀胱灌注药物如表柔比星,吡柔比星等用于术后预防肿瘤复发。这些化疗药物通常会伴发严重的并发症,如尿频,尿急,尿痛,免疫抑制等,因此寻找一种有效且副作用较少的药物对膀胱瘤术后患者进行治疗是临床上亟待解决的问题之一。小檗碱是从中草药黄连素中提取出的季胺型异喹啉类生物碱，又名为黄连素,是一种中医消炎及抗菌药物,长期的炎症可能会导致肿瘤的发,而恶性肿瘤的发生过程中同样能诱导宿主体内炎性微环境形成。近年来有研究表明小檗碱在抗肿瘤方面也具有重要作用。目前,已经在前列腺癌,食管癌,尤文氏肉瘤和乳腺癌中发现其具有抗肿瘤作用。并且小檗碱对人体正常细胞尚未发现有任何毒性,但可以有效杀灭肿瘤细胞肿瘤细胞的侵袭和转移是肿瘤细胞与宿主间相互作用的长时间多步骤的过程,肿瘤细胞扩散到周围及远处器官,需要穿过细胞外基质(ECM)和基底膜(BM),在ECM和BM中含有大量的基质分子如纤维连接蛋白、层粘连蛋白、多种胶原以及蛋白多糖等,而穿越这些屏障需要相关的酶类去溶解上述基质。乙酰肝素酶(heparanase, Hpa)作为一种基质溶解酶,在癌细胞的侵袭和转移中发挥着重要的作用。Hpa是体内惟一能够降解ECM和BM主要成分硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)的一种内葡萄糖醛酸糖苷酶,它可以在特定的部位裂解HSPG及其硫酸乙酰肝素(HS)侧链,促进肿瘤的侵袭和转移,并通过释放和活化肝素结合性生长因子如bFGF和VEGF等诱导肿瘤新生血管的形成。有研究表明小檗碱可以抑制多种肿瘤的迁移和侵袭,但是小檗碱是否通过抑制肝素酶的表达通路来抑制肿瘤细胞的转移及侵袭尚无相关研究报道,因此我们进行了小檗碱对膀胱癌中乙酰肝素酶的作用相关研究,以明确小檗碱是否是通过乙酰肝素酶来抑制膀胱肿瘤的转移及侵袭。为研究小檗碱对膀胱肿瘤侵袭及转移的影响,我们通过采用siRNA技术使膀胱癌T24细胞内乙酰肝素酶基因沉默,并以不同浓度小檗碱处理膀胱癌T24细胞，应Transwell分析,进行细胞迁移及侵袭实验,采用PCR及Western blot检测小檗碱及乙酰肝素酶表达变化情况。结果如下1、Transwell细胞迁移试验结果表明，不同浓度的小檗碱作用于T24细胞后,穿过小室滤过孔的细胞随着小檗碱浓度升高而减少,具有浓度依赖性。乙酰肝素酶小于扰RNA转染后的T24细胞与对照组相比穿过小室滤过孔细胞数明显减少。2、Transwell细胞侵袭试验结果表明：小檗碱处理T24细胞，都会抑制T24细胞的侵袭性,穿透滤过孔的T24细胞随着增高的小檗碱的浓度,细胞数随之下降。乙酰肝素酶小干扰RNA转染处理T24细胞，可以抑制T24细胞的侵袭性,处理后的T24细胞穿透滤过孔的细胞数明显低于对照组。3、RT-PCR结果表明：随着小檗碱浓度升高及时间的延长,乙酰肝素酶基因表达逐渐降低。表明小檗碱对抑制肝素酶表达的影响呈现浓度和时间依赖性。与阴性对照组比较，乙酰肝素酶小干扰RNA转染的T24细胞乙酰肝素酶mRNA表达明显降。4、Western blot结果显示：在蛋白水平，随着小檗碱处理时间的延长和浓度的增加，乙酰肝素酶蛋白表达逐渐降低，小檗碱对乙酰肝素酶的抵制作用呈现浓度和时间依赖性。与对照相比,转染乙酰肝素酶小干扰RNA的T24细胞乙酰肝素酶蛋白表达明显降低。