基于滤纸微孔板的酶联免疫吸附测定方法研究

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纸基微量检测装置是随微流控芯片技术发展而兴起的新热点。纸材料作为-种价廉易得、易于修饰和处理的材料被用作微检测的固相载体,能与低成本的便携式检测器集成。本文成功使用滤纸制作了微孔板,尝试利用二氧化硅微球对该滤纸微孔板吸附蛋白质的能力进行了改进,并分别通过酶联免疫吸附测定的间接法和夹心法检测了羊抗兔IgG和人绒毛膜促性腺激素HCG,绘制出了相应的标准曲线,证明该方法在免疫分析有良好的发展前景。首先,我们用光刻法在普通定量滤纸上制作出了疏水图案,得到了滤纸微孔板。以SU-8光刻胶浸润滤纸,覆盖印有图案的透明塑料掩膜,在强紫外线下曝光。透光区域中的光引发剂发生光化学反应,催化高分子聚合反应而使该区域不溶于显影剂。通过这种方法得到的图案分辨率高,宽度均一。为提高滤纸纤维吸附蛋白质的能力,本文将表面修饰后的二氧化硅微球负载在滤纸表面。二氧化硅的强生物亲和力可以使洗涤过程中包被蛋白质的损耗降低,并将其截留在滤纸表面,从而提高检测信号强度。以酶标兔抗羊IgG为例,负载Si02微球后滤纸微孔板吸附该蛋白质的量提高了20%-700%。然后,我们分别使用酶联免疫吸附测定的间接法和夹心法检测了缓冲液中的羊抗兔IgG和人绒毛膜促性腺激素HCG,其中测定羊抗兔IgG的线性范围为3×10-12mmol/zone-3×10-8mmol/zone,测定HCG的线性范围约为2.5×10-12mmol/zone-2.5×10-8mmol/zone。该方法使生物免疫试剂的消耗量减少至3-5gL/孔、检测时间降至20min/板、滤纸微孔板制作成本可低至约$1.1/板,为研制准确、快速和低成本的疾病检测设备提供了新的思路和可能性。
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