蛇六谷是天南星科魔芋属植物的干燥块茎,含有丰富的生物碱等活性成分,具有抗肿瘤等多种功效。目前人们对蛇六谷生物碱研究较少,对其含量、具体成分尚不清楚。据此,本文对蛇六谷生物碱的提取、纯化和成分鉴定进行了研究,为蛇六谷生物碱的进一步开发利用奠定了基础。本文主要研究内容如下:(1)蛇六谷总生物碱的提取工艺研究以乙醇作为提取溶剂,采用微波辅助提取法从蛇六谷中提取生物碱,然后用酸性染料比色法进行测定。在单因素实验的基础上,通过响应面分析优化工艺参数,得到最佳工艺条件:乙醇体积分数95%,料液比1:20.38(g/mL),微波恒温温度60.0℃,微波时间8.14min。为便于实际操作,将提取条件修正为:乙醇体积分数95%,料液比1:20(g/mL),微波恒温温度60℃,微波恒温时间8.1 min。在此条件下做验证实验,得到蛇六谷总生物碱得率为0.213%,与理论预测值0.218%较为吻合。(2)蛇六谷生物碱的分离纯化蛇六谷生物碱粗提液经有机溶剂萃取后,用高效液相色谱进行分离,对色谱响应较大的17种馏分进行了收集。通过生物碱沉淀反应实验,初步确定有9种馏分含有生物碱,分别是馏分1～馏分4、馏分8～馏分10、馏分13和馏分14。蛇六谷生物碱粗提液分别用三氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇3种有机溶剂进行萃取,均可萃取出生物碱,但萃取出来的生物碱的成分和含量存在明显的差异。对生物碱用有机溶剂萃取和用阳离子交换固相萃取的效果进行了比较,发现有机溶剂萃取效果明显优于固相萃取。蛇六谷生物碱采用高效液相色谱分离纯化。优化后的色谱条件为:色谱柱选择XDB C18柱,规格为150 mm×4.6mm,粒径5μm;流动相为甲醇和1%的乙酸,并采用梯度洗脱程序进行分离;流速1.0 mL/min;柱温40℃;检测波长选择 254nm。(3)蛇六谷生物碱的成分鉴定针对蛇六谷中可能含有易挥发性生物碱,采取蛇六谷经三氯甲烷萃取后直接用GC-MS检测。同时结合谱库检索,初步确定蛇六谷中含有2种易挥发性生物碱,一种为N,N-二甲基十二酰胺,另一种为4-羟基-6-甲基-2(1H)-吡啶酮的衍生物。对馏分8进行氢核磁共振、ESI+质谱、红外光谱以及紫外光谱分析,并结合文献,推测馏分8为5-甲基-1H-咪唑-2-羧酸或5-甲基-1H=咪唑-4-羧酸,是一种两性生物碱。对馏分1～馏分4进行ESI+质谱分析,根据这些组分的主要离子峰信息以及离子的碎裂情况,并结合紫外光谱,初步确定这些生物碱的部分结构信息。其中,馏分1含有芳环、氨基、羟基和乙基等基团;馏分2为3-甲基喹啉的衍生物;馏分3含有芳环、甲基、乙基和亚甲基等基团;馏分4含有芳环、羟基、羰基(或亚甲基)等基团。