魁蚶幼贝生境选择及标志技术研究

来源 :中国海洋大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:jiangyao366
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魁蚶(Anadara broughtonii)为海洋大型底栖贝类,俗称赤贝、血贝、大毛蚶,主要分布于中国、日本、朝鲜半岛、菲律宾沿海及俄罗斯东南部沿海,经济价值较高,是我国重要的出口水产品之一。受海洋环境变化及过度捕捞的影响,近年来魁蚶自然资源急剧下降。为了恢复业已受损的自然资源,我国北方沿海省市相继开展了魁蚶苗种的人工培育及底播增殖,通过人工投放幼贝来增加自然水域的野生种群资源量。为了选择放流魁蚶幼贝的最佳生境,正确评价增殖放流效果,本文主要针对以下四个方面的内容展开研究:温度对魁蚶幼贝潜沙能力及对多棘海盘车捕食能力的影响;底质对魁蚶幼贝选择行为、潜沙能力及对多棘海盘车捕食能力的影响;魁蚶幼贝对底质污染物硫化物耐受的分子机制;魁蚶幼贝的标志技术研究,以为贝类资源的修复、保护及可持续利用提供科学依据。主要研究结果如下:1.温度对魁蚶幼贝潜沙能力及对多棘海盘车捕食能力的影响在实验室条件下,研究了温度变化(10、15、20、25和30℃)对魁蚶幼贝(壳长20-30mm)潜沙能力,及多棘海盘车对魁蚶幼贝捕食速率的影响。结果表明:水温10℃时,魁蚶幼贝的初次潜沙时间(初潜时间)最长,潜沙率最低,分别为28.87 mmin、21.25%,且与其他温度处理组差异显著(P<0.05)。20℃时,魁蚶幼贝初潜时间最短、潜沙率最高,分别为7.49 min、55.63%,可视为魁蚶幼贝的最适潜沙温度。多棘海盘车对魁蚶幼贝的捕食速率受温度影响显著,水温20℃时捕食速率最大,为5.28 ind/d,且与10℃、25℃处理组间存在明显差异(P<0.05)。水温15~20℃时,多棘海盘车的捕食温度系数Q10为2.22,可视为其最适捕食温度。魁蚶幼贝的最适潜沙温度与多棘海盘车的最适捕食温度范围重叠。因此,在水温20℃左右进行魁蚶幼贝底播增殖时,也是多棘海盘车捕食速率最高时期,应加强底播海区多棘海盘车的清除。2.魁蚶幼贝的底质选择性及其潜沙能力评价实验室条件下,研究了4种壳长(10-15 mm、15-20 mm、20-25 mm、25-30 mm)的魁蚶(Anadara broughtonii)幼贝对4种底质粒径(细砾、粗砂、中砂、细砂)的选择模式,并量化分析了20-30mm幼贝在5种底质粒径(增设泥底质)条件下的潜沙能力。结果表明:(1)壳长10-15 mm幼贝的足丝较发达,以附着生活为主,明显偏好粗砂底质。其在2种底质交界位置的分布率、水槽的贴壁率均最高;壳长15-30 mm幼贝转入营埋栖生活,随着规格的增大,幼贝选择的底质粒径亦增大,而在2种底质交界位置的分布率、水槽贴壁率也随之减小。其中壳长15-20 mm幼贝偏好选择中砂,分布率为50.50%,其次为细砂;壳长20-25mm幼贝对不同粒径底质的适应性均较强;壳长25-30 mm幼贝偏好选择粗砂底质,分布率达到65%,其次为中砂。(2)壳长20-30mm幼贝在泥底质中的初潜时间最短,为2.74 min,其次为中沙、细沙;在细砂底质中的潜沙率最高,达到85%,其次为中沙。综合分析认为,壳长20-30 mm幼贝是较适宜的底播苗种规格,而以中砂、细砂为主要粒径组成的海区宜进行魁蚶幼贝的底播增殖。3.魁蚶幼贝对底质污染物硫化物胁迫的转录响应利用RNA-seq技术以魁蚶转录组数据库作为参考文库,构建了魁蚶幼贝对低氧和硫化物胁迫响应的基因表达谱(对照组(GC)、缺氧组(GO)、低浓度硫化物处理组(GOLS,0.2 mmol/L)和高硫化物处理组(GOHS,1 mmol/L)),揭示了基因在转录水平上的全局调控情况。筛选出一系列对低氧和硫化物胁迫敏感的差异表达基因,主要包括抗低氧的血红蛋白基因和Rh免疫球蛋白基因、热休克蛋白基因等免疫功能基因。差异基因的GO富集分析结果表明,GO LS vs. GC显著富集的生物过程主要为t-RNA氨酰化过程;GOHS vs. GC显著富集的生物过程为生物调节、生物和细胞过程监控。KEGG分析结果表明,GOLS vs. GC组氨酰tRNA合成、内质网蛋白加工通路被显著富集,GOHS vs. GC组TNF、 MAPK通路被显著富集。在低浓度硫化物胁迫下,氨酰tRNA合成通路中ARS家族基因的上调表明魁蚶幼贝可能通过该途径来保证遗传信息的完整性;内质网蛋白质加工通路中HSP、OST、PDI家族基因在低浓度硫化物胁迫下的上调表达表明机体对变性蛋白质修复和加快异常蛋白质降解等过程的需求;在高浓度硫化物胁迫下,显著富集的TNF通路中大量BIRC23基因上调表达,MAPK通路中大量MAPK激酶、HSP基因上调表达,表明机体在高硫化物胁迫下抑制细胞凋亡和对大量受损蛋白进行修复、降解的需求。本研究首次在转录组水平下揭示了贝类对硫化物应激相关基因的表达模式,丰富了贝类对硫化物胁迫分子响应机制的研究内容。4.魁蚶幼贝荧光标志和标签标志技术的研究本实验利用不同浓度的茜素红S (200 mg/L ARS,300 mg/L ARS)、钙黄绿素(200 mg/L Cal,300 mg/L Cal)两种荧光染料及不锈钢卡标签(CLIP),对魁蚶幼贝进行了荧光标志和标签标志研究。监测了标志160d后魁蚶幼贝的死亡率、日生长率、脱签率等指标,并检测了荧光标志1年后的标志保留效果。实验结果表明,在160d的养殖实验中,荧光标志组的死亡率、日生长率、湿重均与对照组无显著性差(P>0.05)。标志1年后,荧光标志组的标志保持率均为100%,在荧光显微镜下均可观察到明亮的荧光标志(≥3级)。ARS和CAL高浓度标志组具有肉眼清晰可见的标志(≥4级),ARS处理组的标志质量高于CAL处理组,且ARS浓度>300 mg/L时产生的荧光标志更易于检测。标签组的死亡率、日生长率与对照组均无显著性差异,而标志60d、90d、120d和160d后标签组幼贝的湿重与对照组存在显著差异(P<0.05)。CLIP标签能够被魁蚶幼贝分泌的珍珠质层包裹,标签标志160 d后标签保持率为64.25%。ARS、CAL荧光标志操作简单,标志色保持率高,保留时间长,可作为魁蚶大规模增殖放流活动的有效标志方法,而CLIP标签可携带标志信息,适用于科研等领域的精确标志。
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