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背景和目的:脑出血(Intracerebral hemorrhage,ICH)是卒中的第二大类型,占所有卒中的10%-15%,在我国脑卒中的比例更是高达20%-30%。脑出血后介导的神经损伤主要分为原发性损伤和继发性损伤。越来越多的证据表明,炎症级联反应在其中起到至关重要的作用,它不仅能破坏血脑屏障,加速脑水肿的形成与扩大,同时又能够启动和放大氧化应激反应,增加神经元的凋亡及坏死,加剧脑出血后神经功能损伤。目前研究已表明,脑出血后炎性小体(NLRP3inflammasome)的激活明显增多,进而诱导Caspase-1分子活化,释放促炎性因子如白介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β),IL-18等加重脑内炎症反应,同时它能促进中性粒细胞等向中枢的浸润,进一步扩大脑内炎症反应,加重脑出血继发性损伤。NLRP3还可介导血管内皮通透性增加而加重脑水肿。因此,理论上,抑制脑出血后NLRP3的激活能够减少脑内炎症反应,减轻脑水肿,降低神经功能损伤,起到神经保护作用。右美托咪定是一种具有高度选择性的α2-肾上腺素受体激动剂,临床上用于镇静、止痛和抗焦虑等作用,常用于重病监护病房和临床麻醉。日前有报道指出,右美托咪定在脑创伤后能够有效的抑制NLRP3炎性小体的激活,减少促炎性因子如IL-1β,IL-6等的释放。同时也有报告指出,右美托咪定在脑缺血性损伤中起到神经保护作用。因此,本课题拟研究右美托咪定对脑出血小鼠的保护作用及相关的机制,具有开阔的临床转化前景。方法:本实验采用成年雄性C57BL/6小鼠为研究对象,通过自体血和胶原酶注射两种模型诱导实验性脑出血。将造模后的小鼠随机分为对照组和治疗组。通过改良的神经功能评分(modified Neurological Severity Score,m NSS)和转角试验(corner turn test)评价小鼠的神经功能;通过软件测量脑血肿体积研究药物治疗效果,同时测定脑含水量,进一步反应脑水肿情况;通过流式细胞染色、实时聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)等技术检测药物治疗后对脑内炎症反应和外周免疫细胞浸润的影响;通过蛋白印迹分析以及伊文思蓝(Evans Blue,EB)等技术检测血脑屏障(blood brain barrier,BBB)的完整性和渗透性。结果:1、右美托咪定治疗组可明显改善ICH小鼠的临床症状;自体血模型对照组:第一天,m NSS为7.88±0.44,Corner test为83.75±3.4(%),治疗组m NSS为5.88±0.40,Corner test为67.50±3.13(%),差异均有统计学意义(P<0.05);第三天,m NSS为6.62±0.38,Corner test为71.25±2.27(%),治疗组m NSS为4.26±0.37,Corner test为58.75±2.96(%),差异均有统计学意义(P<0.05);胶原酶模型对照组:第一天,m NSS为9.75±0.41,治疗组m NSS为8.00±0.50,第三天,m NSS为8.13±0.44,Corner test为77.50±3.13(%),治疗组m NSS为5.13±0.40,Corner test为65.00±2.67(%),差异均有统计学意义(P<0.05)。同时右美托咪定治疗后能改善长程预后。2、脑血肿测量结果显示,与对照组相比,治疗组小鼠均具有较低的病变损伤体积,差异有统计学意义(P<0.05)。3、用干湿重法测得的脑组织含水量结果显示:与对照组相比,治疗组病变侧小鼠脑组织含水量明显缩小,差异有统计学意义(P<0.05)。4、通过延迟至12 h、18 h给药,分为三组,与对照组相比,12 h给药组神经功能评分(m NSS和Corner test)明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),而18 h延迟给药组与对照组相比,没有明显差异(P>0.05)。同时,12 h给药组小鼠病变侧脑含水量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。5、RT-PCR结果显示:与对照组相比,治疗组NLRP3组件及IL-1β表达量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。提示右美托咪定能够有效抑制NLRP3炎性小体的激活。6、流式细胞分析技术结果显示:与对照组相比,治疗组向脑组织浸润的免疫细胞明显减少,小胶质细胞激活数量明显减少,释放的促炎性因子减少,抑炎性因子明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。提示右美托咪定能够减少脑出血后炎症反应。7、血脑屏障评价显示:与对照组相比,治疗组Evans Blue渗漏明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。Western bolt关于ZO-1、Claudin-5的检测显示:与对照组相比,治疗组ZO-1以及Claudin-5表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。提示右美托咪定能够保护ICH小鼠血脑屏障的渗透性和完整性。结论:右美托咪定治疗可明显抑制炎性小体的激活,进而改善ICH之后的临床症状及长程预后,减少继发性脑损伤,减轻脑内炎症反应,减少外周免疫细胞向中枢浸润,保护血脑屏障的渗透性和完整性。这些结果提示右美托咪定可以成为治疗ICH的强有力的候选药物。