本研究通过犬肾细胞(MDCK)接种繁殖H5N1禽流感病毒，用甲醛灭活以其作为免疫原滴鼻免疫BALB／C小鼠。另用鸡胚尿囊腔接种病毒并繁殖，差速离心的方法纯化病毒同时用甲醛灭活，作为间接ELISA包被抗原。通过细胞融合与克隆，用血凝抑制实验(HI)和间接ELISA实验方法筛选出3株能稳定分泌AIV H5亚型抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为2D5，3E4，382。经血凝抑制实验腹水效价在1：160-1：640之间，ELISA效价在1：25600-1：51200之间。用Ig亚类鉴定试剂经间接ELISA检测，单抗2D5，3E4属于IgG2a，382属于IgGl亚类。通过交叉反应试验和反应性试验证明三株单克隆抗体具有良好的特异性。 将2D5腹水纯化后与提纯的鸡多抗(IgG)建立了双抗体央心抗原捕捉ELISA(AC-ELISA)方法，并对各试验参数进行优化，筛选出试验最佳反应体系，通过对已知AIVH5亚型阳性抗原、已知AIV阴性抗原和AIV其他亚型抗原检测结果表明，具有较高的特异性。建立的双抗体夹心ELISA方法敏感、特异、省时，能够同时检测大批量样品，对大量的临床样品检测表明本方法对粪便棉拭子，肝脏，鼻腔，脑等具有较高的检出率。证明本方法对AIV疫情的监测有一定的指导意义，是一种理想的AIV H5亚型抗原检测方法。