莱克多巴胺胶体金试纸条的研制

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莱克多巴胺是一种β2肾上腺素受体激动剂,当添加到饲料中,可以提高动物的瘦肉率。但是当人食用了含有超过一定剂量莱克多巴胺的动物组织后,就会对人体造成不同程度的伤害。目前,对莱克多巴胺的检测主要是采用色谱法,但色谱法的前处理过程繁琐、成本高、需要专门的检测仪器,这不适合大规模的推广。故建立一个高效、快速的莱克多巴胺检测方法具有重要的现实意义。本实验采用柠檬酸三钠还原的方法来制备胶体金。采用单因素试验,通过改变柠檬酸三钠加入量﹑加热时间、转速和反应物的添加顺序,对胶体金制备工艺进行优化,结果发现在1%柠檬酸三钠溶液加入量为1.8mL、加热时间10min、转速为300r/min条件下,采用柠檬酸三钠加入到氯金酸的添加顺序可以制备质量较好的胶体金溶液。采用紫外可见光谱法确定胶体金颗粒的粒径和均一度。通过实验发现,所制备的胶体金粒径大约在18.4nm,通过观察胶体金溶液的可见光谱,发现胶体金的均一度也比较好。优化了免疫胶体金的制备条件,最佳蛋白标记量为13.18μg/mL,最适标记pH为8.0,选择终浓度为1%BSA为稳定剂。对比了不同配方的重悬液,确定了配方2为含有1%BSA、1%蔗糖、0.1%Tween-20的磷酸盐缓冲液。优化了抗原和抗体的包被条件,抗原包被浓度为0.5mg/mL,二抗包被浓度为1.0mg/mL,金标稀释度为3倍,金标垫干燥条件为室温条件下45min,抗原包被条件为37℃,10min。对比了三种不同型号的金标垫(MA0270、GL0194和Ahlstrom8964),三种不同型号硝酸纤维素膜(Sartorius140、Millipore135和Pall Vivid170),四种不同型号的样品垫(GL-b01、GL-b02、GL-b03和GL-b04)、三种不同型号的吸水纸(HS5076、HS5080和HS5072)对试纸条性能的影响,最终选择金标垫的型号为MA0270,Millipore135硝酸纤维素膜的型号为Millipore135,样品垫的型号为GL-b01,吸水纸的型号为HS5072。试纸条的灵敏度为20ng/mL,交叉反应实验说明所制备的试纸条与克伦特罗、沙丁胺醇、肾上腺素无交叉反应。在室温下试纸条可以保存2个月以上,在不同批次和同一批次内重复性良好。对试纸条在实际检测中的表现进行了测试,样品经过简单的提取和除脂肪后,直接用于试纸条的测试,和传统的LC-MS的前处理方法相比较简便了很多。在实际检测过程中,对于浓度在20ng/mL以上的阳性样品都可以检出。
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