目的：尝试模拟真菌感染尿液的制备，探索聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性分析(PCR—RFLP)快速检测和鉴定念珠菌的方法。 方法：采用溶细胞酶(Lyticase)结合Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒提取白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌及近平滑念珠菌基因组DNA，同时与十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取结果进行比较。采用PCR—RFLP技术，即对核糖体DNA内部转录间隔区(ITS)的编码基因进行扩增后，用MspI酶切PCR产物产生不同的特异带型，对50份不同念珠菌的模拟尿液标本进行检测和鉴定，并与常规培养结果进行比较，同时检测该技术的敏感性、特异性。 结果：1．Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒提取的DNA含量明显高于十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法，差异有显著性(p＜0.01)。2．真菌通用引物对模拟尿液中常见的白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌及近平滑念珠菌进行扩增，结果均为阳性，在520bp左右均扩增出一清晰的条带。3．应用通用引物分别对模拟白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌及近平滑念珠菌感染尿标本作PCR，检测的敏感度均为10CFU/ml。4．PCR产物酶切后进行0．8％聚丙酰胺凝胶垂直电泳，条带清晰，条带之间分离明显，产生了四种不同的特异性带型，将四种常见念珠菌区分开来。5．PCR—RFLP对模拟标本检测和鉴定结果明显高于常规培养(p＜0.005)，PCR—RFLP法与常规培养法具有较好的一致性(k=0.789，p＜0.01)。 结论：PCR—RFLP技术是早期快速诊断念珠菌感染的有效手段。与常规培养相比较，PCR—RFLP更为可靠、稳定，具有较高敏感性、特异性。