1.目的芎冰处方源自广州中医药大学心脑血管内科专家陈宏珪教授积多年治疗中风之经验,研制成的脑醒喷雾剂,经鼻腔给药治疗AIS取得确切疗效。方中川芎辛、温,气香窜。温窜香并,具有活血行气、祛风止痛作用。能“上行头目,下行血海”,前人有“头痛必用川芎”之说。冰片辛、苦,微寒,能散能走。《本草纲目》记载：冰片“通诸窍、散郁火”,具有开窍醒神、清热止痛作用。冰片是开窍醒神的常用药,多用于中风、痰热、神昏窍闭等症,因其“独行则势弱,佐使则有功”,故常作辅药或引经药用。中医理论认为,辛可发汗解表,行气止痛；温可温阳散寒通络；苦可燥湿解毒,清热泻火。川芎、冰片合用,气血同治,佐使得法,共凑理气、活血、开窍之功,使“气顺则痰自清”,“血行而风自灭”,充分发挥两药辛香走窜之力,以达治疗AIS之功。本课题旨在按照医疗机构制剂批准文号申报资料项目要求,研制成医院用制剂。2.方法2.1川芎提取纯化工艺研究建立川芎中阿魏酸(FA)成分的HPLC含量测定方法。比较川芎两种提取、纯化工艺：1.三因素三水平正交实验考察川芎的最佳水提取工艺,单因素实验考察川芎水提液的醇沉工艺。2.四因素三水平正交实验考察川芎最佳醇提取工艺,醇提液采用大孔树脂纯化。以药液中阿魏酸含量及小鼠断头实验结果为指标,优选出川芎水提醇沉纯化和醇提大孔树脂纯化的最佳工艺参数。2.2冰片溶解方法的研究采用增溶剂增溶、环糊精包合等方法改善冰片溶解状况,并比较采用不同环糊精、不同制备方法进行包合时,冰片的溶解情况及稳定性。2.3制剂pH和防腐剂的筛选以制剂中阿魏酸含量及制剂外观为指标,筛选制剂pH和防腐剂。2.4质量标准的研究按照《中国药典》2010版喷雾剂、滴鼻剂项下进行检查。用薄层色谱对川芎、冰片进行定性鉴别,建立芎冰鼻腔喷雾剂中主要成分阿魏酸的高效液相含量测定方法,冰片的气相含量测定方法。2.5指纹图谱的制定建立川芎药材、川芎提取纯化物、芎冰鼻腔喷雾剂的指纹图谱,并对其专属性和准确性进行考察,研究三者之间的相关性。2.6安全性研究考察制剂对家兔眼粘膜的局部刺激性和蟾蜍上颚的粘膜毒性。2.7稳定性研究选择光照、高温、高湿、暴露于空气中四个条件进行影响因素试验,并进行加速稳定性考察。3.结果3.1川芎提取纯化工艺研究以阿魏酸含量及小鼠断头张口时间为指标,得到最佳提取纯化工艺为：川芎药材以80%的乙醇(12倍量),提取两次(每次1.5h),合并提取液,滤过,减压回收乙醇,浓缩至每mL相当于生药0.5g,离心10min (3000r·min-1),取上清液以1BV·h-1上样流速过HPD-100大孔树脂柱,吸附1h后,以蒸馏水洗至α-萘酚浓硫酸反应呈阴性后,用50%的乙醇洗脱9BV,收集醇洗脱液减压回收乙醇,即得。3.2冰片溶解方法的研究以增溶的冰片量和外观澄明度为指标,结果表明冰片采用羟丙基-β-环糊精包合效果较好,按投料比冰片：羟丙基-β-环糊精(0.3：4),研磨包合1.5h,即得。3.3制剂pH和防腐剂的筛选以阿魏酸含量及制剂外观澄明度为指标,确定本制剂pH为6.0,选择0.01%新洁尔灭作为本处方中的防腐剂。3.4芎冰鼻腔喷雾剂制备工艺川芎药材用12倍量80%的乙醇回流提取两次,每次1.5h,合并提取液,浓缩,3000r·min-1离心15min后,浓缩至阿魏酸质量浓度为0.5mg·mL-1,以1BV·h-1上样速度过HPD-100大孔树脂柱,以蒸馏水洗至无色后,再以50%乙醇1BV·h-1的速度洗脱,收集醇洗脱液,浓缩至无醇味。冰片采用HP-B-环糊精包合后加入其中,加0.01%新洁尔灭,调pH至适宜浓度,加蒸馏水定容。3.5质量标准的研究取3批芎冰鼻腔喷雾剂进行测定,平均pH为6.38,RSD=1.72%；平均装量、每瓶装量不得少于95%；相对密度在1.2642-1.2664之间；每瓶总喷次不得低于100喷；每揿喷量145～166mg；对芎冰鼻腔喷雾剂进行了薄层色谱鉴别,规定芎冰鼻腔喷雾剂中可鉴别出阿魏酸、冰片。HPLC法测定阿魏酸含量,规定每mL芎冰鼻腔喷雾剂含阿魏酸不得少于5.12mg；GC法测定冰片含量,规定每mL芎冰鼻腔喷雾剂含冰片(以龙脑和异龙脑计)不得少于0.024mg。3.6指纹图谱的制定分别制备十批川芎药材、川芎提取纯化物、芎冰鼻腔喷雾剂的指纹图谱,发现相似度较好,三者有明显相关性。3.7安全性研究以家兔粘膜刺激实验、蟾蜍上颚粘膜毒性实验考查制剂的粘膜刺激性,结果表明本制剂具有轻微粘膜刺激性和较小的纤毛毒性。3.8稳定性研究稳定性实验结果表明,芎冰鼻腔喷雾剂外观形态良好,但阿魏酸成分的含量在三个月内有降低趋势。