肾小管间质纤维化(renal interstitial fibrosis，RIF)是各种慢性肾脏疾病进展到终末期肾功能衰竭(end stage renal disease，ESRD)的主要病理基础，决定了肾脏纤维化的发展进程。因此研究肾小管间质纤维化的机制已经成为了肾脏病界研究的热点。　　 研究表明，肾小管上皮细胞-间充质转分化(epithelial to mesenchymal trans-differentiation，EMT)为RIF发生的重要机制。上皮细胞在特定的病理情况下，可通过上皮细胞-肌成纤维细胞间的逆向分化成为具有多向分化潜能的间充质细胞，即EMT。在这一过程中，肾小管上皮细胞失去上皮细胞的表型，获得新的间充质细胞的特点，如钙粘素(E-cadherin)的表达减少、重新表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)。根据本课题组前期试验研究结果，上皮细胞逆向分化过程中一过性表达干细胞标记物CD133，本文推断肾小管上皮细胞逆向分化可能存在干细胞机制：上皮细胞逆向分化为间充质细胞，间充质细胞获得组织干细胞潜能，在后续信号的特定作用下，分别向肾小管细胞，抑或肌成纤维细胞分化，起积极/消极的修复作用。　　 目的：为了进一步研究肾小管上皮细胞转分化过程中是否有干细胞生成，试图阐明EMT的可能干细胞机制；探讨终止EMT的策略和方法，为最终阻止肾纤维化提供实验室依据和理论基础。本研究在体外建立EMT细胞模型，重点研究干细胞标记物Oct-4、CD24基因在肾小管上皮细胞转分化中的表达情况。　　 方法：采用10-9mol/L血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ，AngⅡ)刺激体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)。建立肾小管上皮细胞转分化细胞模型。实验分为空白组，AngⅡ诱导组，每组设3复孔，共培养3d。用倒置相差显微镜、扫描电镜、透射电镜观察细胞形态和超微结构。AngⅡ诱导组设10个刺激时间点，在刺激的不同时间点提取细胞的RNA和蛋白质，分别采用RT-PCR和Western blot 方法检测间充质细胞标志α-SMA、上皮细胞标志E-cadherin、胚胎干细胞标记物Oct-4、肾脏干细胞标记物CD24 mRNA和蛋白质的表达，并研究其时效性表达变化规律。制备各个刺激时间点的细胞爬片，采用细胞间接免疫荧光法定性检测α-SMA、E-cadherin、Oct-4、CD24的蛋白表达。　　 结果：培养3d后，AngⅡ诱导组细胞形态学发生改变，从原有典型的上皮细胞形态转变为长梭形类似成纤维细胞的形态，失去原有的细胞极性，微绒毛结构基本丢失；并出现肌成纤维细胞所具有的微丝束和致密体。RT-PCR结果显示，AngⅡ刺激10min时开始产生α-SMA，随AngⅡ刺激时间的延长，α-SMA的表达逐渐增加，显著高于对照组，差异有显著性意义(P＜0.05)。而E-cadherin的表达逐渐下调，显著低于对照组，差异有显著性意义(P＜0.05)。Western blot和细胞免疫荧光结果一致，α-SMA蛋白在刺激1h开始表达，随时间的延长，表达逐渐增加，而E-cadherin蛋白的表达逐渐下调，与mRNA表达趋势一致。α-SMA、E-cadherin 的表达变化存在时间依赖性方式。提示肾小管上皮细胞转分化细胞模型成功建立。AngⅡ刺激25min，NRK-52E细胞开始表达Oct-4 mRNA和CD24 mRNA，1h表达量最高，4h后消失。Westem blot和细胞免疫荧光显示相似的变化规律，AngⅡ刺激1h，NRK-52E细胞开始表达Oct-4和CD24蛋白，4h表达量最高。而空白对照组均不表达Oct-4和CD24。刺激组Oct-4和CD24的表达显著高于对照组，有统计学意义(P＜0.05)。Oct-4、CD24表达的规律一致，表达量呈时间依赖。　　 结论：　　 (1)成功建立肾小管上皮细胞转分化细胞模型。　　 (2)在肾小管上皮细胞转分化细胞模型中，上皮细胞标志E-cadherin表达逐渐下调，间充质细胞的标志α-SMA表达逐渐上调，肾小管上皮细胞发生成纤维化样改变。　　 (3)在肾小管上皮细胞转分化细胞模型中，转分化细胞持续表达干细胞标记物Oct-4、CD24，证实肾小管上皮细胞转分化过程中有干细胞生成。