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红曲是一种“药食同源”的典型代表真菌,红曲培养物具有多种生理活性物质,近来新发现红曲多糖是一种具有免疫调节、保肝解毒功效的活性物质,本文对红曲菌液态发酵生产多糖的工艺条件、红曲多糖提取纯化和结构的初步鉴定进行研究。
通过对实验室8株红曲菌进行筛选,得到一株多糖含量较高的红曲菌ZKOA;优化后的液态发酵培养基为:蔗糖40g/L,酵母粉4.5g/L,KH2PO4·3H2O3.5g/L,MgSO40.4g/L,植物油2mL/L;优化发酵工艺后得到的发酵条件是:接种量8%,种龄30h,发酵液起始pH5.0,发酵时间90h。在此条件下,红曲多糖的产率最高可达7.6g/L。在搅拌速率为170r/min,通风量为22NL/min的条件下,20L发酵罐中红曲粗多糖含量可达到7.34g/L;在此条件下,发酵液中红曲52
多糖的含量(W)与菌体量(X)的关系为W=0.0007X6.1898。
实验研究了红曲多糖的脱蛋白工艺,工艺路线为:发酵液在60℃下浓缩至原体积的1/5→乙醇沉淀得粗多糖→复溶去不容物→上清液用等电点法脱蛋白,去沉淀→0.2%的木瓜蛋白酶45℃酶解3h→Sevag法脱蛋白→得到无游离杂蛋白的多糖溶液。
脱蛋白后多糖溶液中加入4倍体积的工业酒精,沉淀多糖,沉淀物干燥后为白色,色素和其他小分子物质基本得到脱除。
用DEAE—纤维素层析纯化多糖提物,依次用纯水、0.2mol/LNaCl、0.4mol/L,NaCl、0.6mol/LNaCl洗脱,可以得到三个不同等级分子量的多糖,其中两种测得分子量分别为62774D和74653D的级分有紫外吸收,可初步判断是蛋白糖;分子量为2000D的多糖组分有不同的带电情况。HPLC测定单糖组分,得出此红曲多糖组分中含有葡萄糖和半乳糖。