【摘 要】
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随着人们对中药的研究越来越深入,大量的中药材被广泛用于疾病防治。川楝子中含有川楝素等多种活性成分,具有较强的驱虫和杀虫作用,对鸡球虫病也要有较好的治疗效果,但其预防作用却没有相关研究,且其提取物也未制备成相应产品。本研究针对上述现状,采用系统溶剂法提取川楝子的活性成分,通过体外杀虫活性试验获得具有最佳杀虫活性的川楝子提取物;在此基础上,体内评价其对人工感染柔嫩艾美耳球虫雏鸡的保护作用;最后,检测川
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随着人们对中药的研究越来越深入,大量的中药材被广泛用于疾病防治。川楝子中含有川楝素等多种活性成分,具有较强的驱虫和杀虫作用,对鸡球虫病也要有较好的治疗效果,但其预防作用却没有相关研究,且其提取物也未制备成相应产品。本研究针对上述现状,采用系统溶剂法提取川楝子的活性成分,通过体外杀虫活性试验获得具有最佳杀虫活性的川楝子提取物;在此基础上,体内评价其对人工感染柔嫩艾美耳球虫雏鸡的保护作用;最后,检测川楝子提取物对盲肠内肠道菌群的影响,探究菌群变化对雏鸡免疫功能的影响。主要研究结果如下:1.川楝子提取物的制备及其体外杀球虫活性研究采用系统溶剂法,依次使用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、70%乙醇和蒸馏水对川楝子粉末中的活性成分进行提取分离,并计算其得率。将上述5种提取物制备成浸膏,分别溶于4%二甲基亚砜溶液中,在体外条件下与未孢子化卵囊一起培养,筛选出具有最佳杀虫活性的提取物,然后将其梯度稀释后与未孢子化卵囊一起培养,计算其对卵囊的半数致死浓度(Lethal concentration of 50%,LC50)。结果:上述5种溶剂中提取物的得率依次为3.60%、0.98%、1.00%、31.75%和8.45%。其中川楝子在70%乙醇溶剂中的得率最高。由于70%乙醇和蒸馏水提取物对卵囊孢子化抑制效果最好,因此我们选用川楝子乙醇提取物进行体外杀虫活性试验。与阴性对照组相比,川楝子乙醇提取物能有效降低卵囊孢子化率;阳性对照组相比,川楝子乙醇提取物组的卵囊孢子化率的数值均显著高于阳性对照组(p<0.05),得到其LC50为245.83μg/m L。结论:5种提取中,70%乙醇提取物的得率最高,其LC50为245.83μg/m L。2.川楝子乙醇提取物对人工感染柔嫩艾美耳球虫雏鸡的保护作用研究1日龄雏鸡养至7日龄后,分为7个组,每组20只雏鸡,分别为低剂量组(2.5g/kg),中剂量组(5g/kg),高剂量组(10g/kg),阳性组(鸡球虫散,10 g/kg),川楝素(3mg/kg),空白对照组和模型组。雏鸡正常饲养至10日龄后进行预防给药,于14日龄,除空白组外其余6组经口感染柔嫩艾美耳球虫卵囊,并于感染后第8d采样。结果:川楝子乙醇提取物低中高剂量组、川楝素组、阳性组的抗球虫指数值(Anticoccidiosis index,ACI)分别为89.38、142.95、162.56、166.47和128.81。与阳性药物鸡球虫散相比,高剂量的川楝子乙醇提取物更能增加雏鸡的相对增重率、存活率和减轻雏鸡感染球虫后引起的盲肠、肝和肾组织病变,效果优于阳性药物鸡球虫散,与川楝素一致。结论:川楝子乙醇提取物在浓度为10g/kg时的ACI值较高,达到中效抗球虫药物水平,对人工感染柔嫩艾美耳球虫雏鸡具有较好的保护作用,其效果优于阳性药物鸡球虫散,与川楝素一致。3.川楝子乙醇提取物对盲肠内肠道菌群的影响为进一步探究肠道菌群变化对雏鸡免疫功能的影响,本研究采用高通量测序的方法检测肠道菌群变化。结果:与阳性药物鸡球虫散相比,高剂量的川楝子乙醇提取物更利于有益菌的生长,减轻盲肠内的炎症反应的效果更好,其作用强于阳性药物鸡球虫散,接近于川楝素。结论:经浓度为10g/kg的川楝子乙醇提取物干预后盲肠内乳酸杆菌等有益菌比例升高,进一步增强雏鸡的免疫功能,且其作用强于阳性药物鸡球虫散,与川楝素一致。综上所述,川楝子乙醇提取物能通过抑制卵囊的孢子化过程来抑制球虫的增殖,减轻对盲肠的损伤,提高雏鸡的相对增重率和存活率,增加盲肠内乳酸杆菌等有益菌比例,进一步增强雏鸡的免疫功能,从而提高其对人工感染柔嫩艾美耳球虫雏鸡的保护作用。
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