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[目的]葡糖基转移酶GtfB为致龋菌变形链球菌的胞外抗原,羧基端葡聚糖结合区Glu为GtfB所包含的功能区之一。本研究中的Glu-FTH为Glu与铁蛋白(ferritin,FTH)融合表达、自组装所形成的纳米粒子防龋多肽疫苗。通过大肠杆菌蛋白表达系统提取融合蛋白Glu-FTH,应用镍柱亲和层析技术纯化Glu-FTH。观察防龋疫苗Glu-FTH对树突状细胞(dendritic cells,DCs)的活化作用,以及DC对Glu-FTH的摄取作用。评价Glu-FTH的黏膜免疫反应和龋齿保护作用,探索FTH对防龋疫苗黏膜免疫反应水平和类型的影响。[方法]应用镍柱亲和层析技术纯化融合蛋白Glu-FTH,根据SDS-PAGE分析纯化条件。依据western blot技术验证蛋白纯化的结果。随后通过透射电镜观察Glu-FTH的形态并分析其粒径分布。将6周BALB/c小鼠随机分为5组,即Glu-FTH、Glu、FTH、Glu+Poly(I:C)、PBS组。经滴鼻途径免疫小鼠,首次免疫(第0周)后,于第2、4周加强免疫。第0、2、4、6、8、10、12、16、20周,收集血清、唾液。ELISA检测血清中特异性抗体IgA、IgG、IgGl、IgG2a水平,以及唾液中特异性抗体IgA水平。免疫后第8周取小鼠脾脏,ELISA检测小鼠脾细胞培养上清中细胞因子IFN-γ和IL-4的水平,分析免疫反应的类型。18天雌性Wistar大鼠,随机分成5组,第20～22天应用抗生素。第23天免疫大鼠,免疫方式同小鼠。第25～28天大鼠口内接种S.mutans UA159。定菌后第1～6周,每周检测大鼠牙菌斑中变形链球菌数量。于首次免疫后第57天收集大鼠血清、唾液,分析其特异性抗体水平。第—120天处死大鼠,对其磨牙进行龋齿计分分析。应用流式细胞技术检测DC对纳米粒子疫苗的摄取,并分析纳米粒子疫苗对DC成熟的影响。[结果]SDS-PAGE和Western blot证明蛋白Glu-FTH分子量与预测值一致,蛋白纯化效果较好。透射电镜结果表明Glu-FTH和FTH为球形纳米粒子,粒径分别为15.9±1.4nm、14.1±1.1nm。与单独免疫Glu的小鼠相比,免疫Glu-FTH小鼠的唾液、血清中特异性抗体IgA、IgG水平更高,第6、8、10、12、16、20周时二者有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。Glu-FTH免疫的小鼠比Glu联合佐剂Poly(I:C)免疫的小鼠的血清中特异性抗体IgG水平更高,第10、12、20周二者有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。Glu-FTH小鼠比Glu+Poly(I:C)小鼠的血清中特异性抗体IgA水平更高,第6、8、10、12、16、20周二者有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。Glu-FTH小鼠比Glu+Poly(I:C)小鼠的唾液中特异性抗体IgA水平更高,第4、6、8、10、12周二者有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。与单独免疫Glu的小鼠相比,Glu-FTH免疫小鼠的血清IgG1/IgG2a值以及脾细胞分泌IL-4水平明显更高。Glu-FTH以及Glu+Poly(I:C)大鼠牙菌斑变形链球菌数量逐渐减少,定菌后第4、5、6周比PBS组数量少,二者有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。与Glu或FTH相比,DC对Glu-FTH摄取率更高。Glu-FTH蛋白显著地提高了 BMDC表面分子CD80,CD86和MHC-Ⅱ的表达水平(p<0.05)。[结论]纳米粒子FTH作为抗原Glu的递送系统,可促进DC对Glu-FTH的摄取以及DC的成熟;增强了防龋疫苗的免疫反应,主要诱导Th2型免疫反应。