TREK-1对OGD共培养神经元存活率的影响及脉络宁注射液的干预作用研究

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目的:观察双孔钾通道TREK-1(TWIK-related potassium(K~+)channel-1)对OGD共培养神经元存活率的影响及脉络宁注射液的干预作用,并探讨其谷氨酸摄取及转运相关机制。方法:1.分别进行大鼠星形胶质细胞和神经元的原代培养,运用大鼠TREK-1 DNA质粒转染星形胶质细胞,建立TREK-1过表达模型;2.采用氧糖剥夺(Oxygen Glucose Deprivation,OGD)共培养星形胶质细胞和神经元,模拟体内脑缺血环境,共培养分为对照组、常氧模型组、常氧TREK-1过表达组、常氧脉络宁注射液组、缺氧模型组、缺氧TREK-1过表达组、缺氧脉络宁注射液组;3.RT-PCR法检测星形胶质细胞中谷氨酸特异性转运体(GLT-1)、嘌呤能受体(P2X7)、谷氨酰胺合酶(GS)、TREK-1通道和Caspase-3的表达变化;Western blot法检测TREK-1、GLT-1、P2X7表达;4.LDH试剂盒法检测神经元LDH释放;FITC/Propidium Iodide双染色法和TUNEL染色法检测神经元凋亡;谷氨酸检测试剂盒检测星形胶质细胞谷氨酸摄取率;Western blot法检测NR2B、凋亡信号因子Caspase-3表达。结果:1.运用大鼠TREK-1 DNA重组质粒成功转染星形胶质细胞,建立TREK-1过表达模型;2.OGD后,TREK-1过表达可提高共培养后星形胶质细胞谷氨酸摄取率,GLT-1、GS、TREK-1 mRNA表达量,降低Caspase-3表达量,对P2X7表达量无影响;3.OGD后,TREK-1过表达可提高神经元的存活率;4.TREK-1过表达可降低氧糖剥夺神经元NR2B、Caspase-3的表达量;5.脉络宁注射液对星形胶质细胞谷氨酸摄取率,GLT-1、GS、TREK-1、Caspase-3、P2X7 mRNA表达量无影响;6.脉络宁注射液对氧糖剥夺神经元存活率没有影响,不能改变神经元NR2B表达量。结论:1.运用TREK-1 DNA重组质粒可成功转染大鼠大脑皮质星形胶质细胞;2.TREK-1过表达增强GLT-1、GS表达量,增强谷氨酸摄取能力;3.TREK-1过表达可提高氧糖剥夺神经元的存活率;4.在OGD共培养条件下,脉络宁注射液对神经元没有保护作用。
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