子宫内膜异位症(EMs)是一种以痛经、持续下腹痛、月经失调、不孕、性交痛为主要临床症状的常见妇科疾病，其发病率近年来持续升高，育龄妇女检出率为2％～48％不等。EMs病因学仍不清楚，主要有经血逆流学说、上皮化生学说、血液淋巴播教学说、免疫学说等，但至今没有一种学说可以完全解释EMs的所有病理、临床表现，因此被学者归结为一种与机体的遗传因素、免疫因素、内分泌学说等相关的多因素疾病。 EMs的临床生物学行为表现出良性病变的恶性行为，如侵袭种植性、增殖信号的自主调控、抗增殖信号的不敏感性、凋亡抑制、血管生成活跃等，许多与肿瘤发生相关的细胞因子也与EMs有密切联系，主要有VEGF、EGF、Cox-2、IL-6等。 促红细胞生成素(Epo)是一种与红细胞生成、分化密切相关的细胞因子。最新研究表明，其生理学作用多样，有促血管生成、抑制肿瘤细胞及中枢神经元凋亡、促进其他细胞因子表达、调节免疫细胞功能等，有关Epo在肿瘤发生机制中作用的研究已成为目前的热点之一。 新近研究证实，血管内皮生长因子(VEGF)的促血管生成作用参与了EMs发病机制。其与Epo的协同表达作用已在部分脑肿 绍四军医大学硕士学位论文5....甲.口暇..即....甲瘤组织中得到证实，这种协向表达受到抑瘤荃因一一钩倪L荃因的调控。 目前，有关Epo与EMs相关性的研究及Epo、VEGF在EMs组织中是否存在协同表达的研究尚未见报道。2003年，我科樊杨等应用基因芯片技术检测EMs相关墓因的差异表达情况，发现E加一R表达显著增强，因此，我们决定对Epo、VEGF在EMs中所发挥作用进行研究。研究目的:1.探讨Epo、VEoF在EMs异位子宫内膜组织的定位表达;2.揭示E即基因及蛋白表达在EMs中的生物学意义，为阐明EMs 的分子病因学奠定基础。研究方法:1.采用免疫组织化学法、原位杂交法检测38例EMs患者异位子 宫内膜组织、21例正常子宫内膜组织中Epo、VEOF功只NA及 蛋白的表达情况。2.采用原代子宫内膜细胞培养、MTT法、免疫组织化学方法对 12例EMs患者异位子宫内膜组织、15例正常子宫内膜组织进 行了原代培养、生长曲线绘制及子宫内膜腺体细胞纯度的鉴 定。3.免疫组化荧光双标法检侧原代子宫内膜细胞缺氧状态下的 Epo、VEGF蛋白的表达.4.ELISA法检测原代子宫内膜细胞缺氧状态下细胞培养上清液 中Epo分泌盆.5.流式细胞术分析原代子宫内膜细胞缺氧状态下及Epo干预情 况下的凋亡情况。6.免疫组化检测原代子宫内膜细胞缺氧状态下Cleavedc山币‘姆召 表达情况。7.透射电子显微镜观察原代子宫内膜细胞缺氧状态下超微结构刀哪阴雌.目时ojo加拍洲。朋碑叼阴.川响外大班雌从即和呜洲从材U 第四军医大举硕士学位论文6.甲曰.甲........曰.. 改变。研究结果:1.EMS异位子宫内膜组织中Epo、VEGF mRNA及蛋白表达明显 上调，与正常子宫内膜组织相比，差异显著(尸<0.05)。2.EMs异位子宫内膜组织与正常子宫内膜组织中万加、VEGF mRNA及蛋白表达在子宫内膜增殖期、分泌期分别没有差异 (尸>0.05)。3.EMs异位子宫内膜组织中，Epom只NA、vEOF功RNA表达上 调具有一定的协同性(C=0.733，尸<0.001)。4.EMs异位子宫内膜细胞在对数生长期生长速度大于正常子宫 内膜细胞。5.原代培养的EMs异位子宫内膜细胞Epo、VEGF表达强度大于 正常子宫内膜细胞。6.缺氧刺激后，原代EMs异位子宫内膜细胞、正常子宫内膜细 胞Epo、VEGF表达强度均上调，且具有一定的协同性(C= 0.864，尸<0.05)。7.原代EMs异位子宫内膜细胞、正常子宫内膜细胞均可分泌 E卯，但EMs异位子宫内膜细胞分泌t(9 .1土1 .5浏IUlml)高 于正常子宫内膜细胞(2.5士O.4mRJI:ml，护9.67尹切.01):缺氧 刺激后，两组子宫内膜细胞Epo分泌分别上调(14.2士 1 .7InllUlml，10.6土1.4功丑Jlml)。8.缺氧刺激后，原代E油异位子宫内膜细胞、正常子宫内膜细 胞均出现凋亡(13.1%，243%)，50lljlml Epo可以减少缺氧 诱导的E加IS组细胞凋亡(5.3%)。9.Cleaved casp已姆.3的表达在缺氧处理的EMs异位子宫内膜及正 常子宫内膜中表达升高(70%，91%，尸<0.05);501U翔目EPO 可以降低EMs组细胞Cleaved伪叼珍Se.3表达(34%).刀甲断愉朋tojo加相侧比朋‘叼阴砚，俩肠润和啥筋呵曲毗用献材盯 第四军医大攀砚士举位论文7................10.超徽结构观察显示:缺载可导致原代EM台异位子宫内膜细胞 凋亡或坏死代EMS异位子宫内膜细胞凋亡或坏死，凋亡坏死 比率为1:4;入Epo干预后，凋亡坏死比率下降为1:1:5研究结论:1 .E加、VEGF功RNA及蛋白在正常子宫内膜组织存在一定程度 的表达;其表达在子宫内膜增殖期与分泌期无显著差异。2.助。、VEG凡曲囚A及蛋白在EMs组织中表达明显上调，与EMs 发生密切相关。3.Epo、VEGF拍RNA及蛋白在子宫内膜异位症组织中表达上调 呈一定协同性;缺氧环境是诱导E