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目的：宫颈癌是严重威胁广大妇女生命与健康的恶性肿瘤，近些年发病年龄趋于年轻化, 传统的治疗方法手术和放射治疗（放疗）可能使患者丧失或降低卵巢功能，故年轻患者术后生存质量大幅下降 ，合理应用激素替代疗法（Hormone Replacement Therapy, HRT）可提高年轻患者的生活质量，但其潜在致癌问题及对原有疾病的影响是值得十分关注的。本研究旨在通过细胞培养探讨雌二醇（E2）、孕酮（P）对宫颈癌细胞株Hela细胞生长的影响，从而为临床宫颈癌术后患者可否进行HRT，提供充分的依据。 方法：1.细胞培养：常规方法复苏冻存的宫颈癌细胞株Hela细胞接种于100ml培养瓶中，于37℃、5%二氧化碳的饱和湿度培养箱内松盖培养。以0.02%乙二胺四乙酸（EDTA）消化传代。2.宫颈癌细胞株Hela细胞ER、PR测定：取对数生长期的Hela细胞，制成单细胞悬液，滴于多聚赖氨酸处理的载玻片上，自然晾干，立即以4℃冷丙酮固定10min ，以链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接（SP）法测定Hela细胞ER、PR。结果判定采用H-score法：每一受体2张玻片，每片至少观察5个视野，阳性染色为细胞核内出现棕黄色颗粒，以i代表染色深浅，共0～<WP=4>3分：0分为不着色；1分为着色浅，呈淡黄色；2分为中度着色，呈深黄色；3分为着色深，呈棕色/咖啡色。Pi代表每一着色程度的细胞所占的比例，为0-100%，H-score=∑Pi（i＋1）,满分为4分。3.细胞增殖实验：取对数生长期的Hela细胞，制成浓度为3×104个/ml的单细胞悬液，接种到96孔培养板，每孔200ul，过夜贴壁，4℃培养1h，以促进细胞同步化生长;换培养液，实验组根据加入药物的不同分为E2组、P 组和E2+P组，E2组分别加入含E2 0.50、1.00、5.00和10.00nmol/L（nM）的培养液，P 组分别加入含P 0.01、0.10、1.00和 10.00umol/L(uM) 的培养液，E2+P组中E2和P的终浓度分别同E2组、P 组；对照组加入含0.03%乙醇的培养液，每一浓度均设8个复孔，继续培养72h后，每孔加入20ul浓度为5mg/ml的MTT溶液，继续孵育4h后吸净上清液，每孔加入二甲亚砜200ul，振荡10min，用酶标光度仪在波长为492nm时测定每孔的吸光度（A）值，并计算抑制率（抑制率=对照组A值-实验组A值/对照组A值）。本实验重复3次。4.细胞周期和细胞凋亡率的检测：将浓度为3×104个/ml的Hela单细胞悬液，接种于100ml培养瓶，过夜贴壁，同步化处理后换培养液，实验组取各组最大浓度，即E2组含E2为10.00 nM, P组含P为10.00uM，E2+P组E2和P的终浓度分别同E2、P组,对照组加入含0.03%乙醇的培养液。继续培养72h，EDTA消化后收集<WP=5>细胞，用70%的冷乙醇固定，碘化丙啶（PI）染色后置流式细胞仪（FCM）分析。5.细胞的形态学观察：（1）倒置显微镜观察：将浓度为3×104个/ml的Hela单细胞悬液接种于 24孔培养板，每孔1ml，待细胞生长至对数生长期，换培养液，实验组、对照组处理同4。继续培养24和72 h，倒置显微镜下观察并摄影。（2）光学显微镜观察：24孔培养板每孔预先置一盖玻片，然后接种相同浓度（3×104个/ml） 的Hela单细胞悬液，每孔1ml，实验组、对照组处理同上。继续培养72 h，取出盖玻片，姬姆萨（Giemsa）染液染色10～15min，光学显微镜下观察。（3）电子显微镜观察：将相同浓度的Hela细胞悬液，接种于100ml培养瓶中，上述方法培养72h，EDTA消化后收集细胞，4%戊二醛4℃固定、脱水、浸透、包埋、切片、染色，采用JEM-1230型透射电子显微镜观察。6．Hela细胞bcl-2蛋白表达的测定：接种相同浓度的Hela单细胞悬液于100ml培养瓶中，实验组、对照组处理同4。继续培养72h，EDTA消化后收集细胞，70%冷乙醇4℃固定过夜，调整细胞数为1×106个/ml，加入鼠抗人bcl-2单克隆抗体，4℃冰浴1h，以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为空白对照；加入FITC标记的羊抗鼠IgG抗体作为二抗，4℃暗处孵育30min。置FCM检测,并计算bcl-2蛋白的荧光指数FI[FI=(bcl-2蛋白的平均荧光强度-对照样品的平均荧光强度)/正常组织基因蛋白的平均荧光强度]。统计学方法：细胞吸光度值（A）和ER、PR的表达<WP=6>用±s表示，ER和PR比较，用t检验。多组间比较，采用方差分析及Spearman相关分析。计数资料用Χ2检验。所有数据均用SAS软件包进行统计。P＜0.05为差异有显著性意义。结果：1.Hela细胞ER、PR的表达：Hela细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性染色, 其ER和PR均有表达，ER含量为0.99±0.30， PR含量为2.57±0.09，两者相比，后者明显高于前者(P＜0.01)。2.E2、P和E2＋P对Hela细胞的增殖情况的影响：E2浓度为0.50nM时，对Hela细胞生长有轻度促进作用，但与对照组比较，差异无显著性意义（P＞0.05）。当浓度为1.00～10.00nM时，对细胞生长的促进作用较明显，与对照组比较，差异均有显著性意义(P＜0.01)，且随着浓度的增加，A值具有上升趋势，A值和E2浓度呈显著正相关性（P＜0.05)。相反，P与E2＋P两组细胞均在P浓度为0.10、1.00、10.00uM时对Hela细胞的增殖有明显抑制作用（P＜0.01)，且随着浓度的增加，增殖抑制率升高，增殖抑制率与浓度之间具有显著正相关性（P＜0.05)。在P浓度均为10.00uM的P组和E2＋P组，单独经P作用后的细胞增殖?