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H9N2亚型禽流感病毒作为最主要的低致病性禽流感毒株广泛流行于我国,对养禽业造成了巨大的经济损失。此外,该病毒还具有直接感染人、或为高致病性禽流感病毒H5N1以及新型H7N9亚型禽流感病毒提供内部基因的能力,从而感染人,严重威胁着公共卫生安全,更加引起人们对H9N2亚型禽流感病毒关注。为了研究H9N2亚型禽流感病毒对哺乳动物的致病力,对实验室分离到的19株H9N2亚型禽流感病毒进行了病毒纯化,并用纯化后的病毒滴鼻感染BALB/c小鼠,每株病毒感染6只,感染剂量106EID50/只。结果发现,随着年份的推移该H9N2亚型禽流感病毒的致病力有所改变,2012年分离的毒株虽然总的感染量低于2010-2011年份的毒株,但仍有较高致病力的毒株存在。为了研究H9N2亚型禽流感病毒在基因水平上的遗传演化趋势,及其与新型H7N9禽流感、高致病性禽流感病毒基因序列的联系,本试验对上述19株H9N2亚型禽流感病毒及实验室已测序的26株病毒进行遗传演化分析。HA基因演化分析显示,45株H9N2亚型禽流感病毒主要属于Ck/BJ/1/94分支,而在这个大分支里有多达34株病毒都划分到了未有文献报道的第三小分支,这反应了H9N2亚型禽流感病毒HA基因近几年的演化很快,同时也解释了现有疫苗无法很好地保护现在的流行株这一现象。六个内部基因进化分析显示,内部基因出现重组多样性,并且与2013年的新型H7N9病毒的内部基因有很高的同源性。通过对氨基酸位点的比较分析发现,不同年代毒株的氨基酸位点呈一定规律演化,随着年份的推后,这些氨基酸位点的演化都与新型H7N9流感病毒较为一致。基于H9N2禽流感对人类健康及养禽业的巨大威胁,本研究对H9N2亚型禽流感病毒细胞灭活苗进行了初步研制。结果显示,转瓶培养MDCK HA-2细胞的最佳接毒剂量为3×104TCID50,利用含2%小牛血清的DMEM培养液作为病毒维持液,且终体积为50m1,在细胞培养箱中培养48h后收毒。在制备灭活苗时,通过不同的佐剂比较,结果发现p-丙内酯灭活剂灭活病毒的效果最好。将制备好的H9N2细胞灭活苗选用不同剂量免疫3周龄SPF鸡只,20μl/只的疫苗免疫剂量即可对鸡只起到100%的保护效力。这些结果均表明,该细胞苗具有巨大的商用价值。