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目的:观察凉血消疕汤治疗寻常型银屑病的临床疗效,并通过细胞实验的方法探讨凉血消疙汤含药血清对HACAT细胞增殖和凋亡的作用,为凉血消疕汤在临床的广泛应用提供理论基础。方法:一.临床观察1.选取46例病人,均为我院银屑病专科门诊诊断为寻常型银屑病的患者,随机分为治疗组和对照组。其中治疗组26例,对照组20例。两组在年龄、性别、病程上无显著性差异(P＞0.05),具有可比性。2.治疗组给予凉血消疕汤内服,一日一剂,分两次服;对照组给予郁金银屑片,一日三次,每次四片。治疗组和对照组均外用煤焦油,搽于患处,每日一次,两小时后去除。3.两组均服药4周为一个疗程,连服2个疗程后进行疗效评估,同时记录不良反应。4.观察结束后将数据进行统计分析,计数资料用x~2检验,计量资料用U检验。二.实验研究1.中药血清制备将药物按体表面积折算成动物的等效剂量,大鼠生药量为12.825g/kg。然后在此基础上分别采用等效剂量的0.5倍、等效剂量、等效剂量的2倍,即中药低、中、高三种不同浓度。用生理盐水替代中药制剂灌注动物,采集血清作为阴性对照。连续给药7天,于末次灌胃的2h后乙醚吸入麻醉下腹主动脉采血。2.培养基的配制基本培养基:DMEM培养基以蒸馏水配制,加2g/L的NaHCO3,0.22μm微孔滤膜过滤除菌,4℃保存。完全培养基的配制:90%基本培养基和10%胎牛血清、青霉素、链霉素各10万U/L。含药培养基配制:按80%DMEM高糖、10%胎牛血清、10%含药血清的比例配制。3.HaCaT细胞的培养用完全培养基培养角质形成细胞株HACAT,置于37℃5%CO2孵育箱中培养,每3d～4d传代一次,取对数生长期的细胞用于实验。4.实验分组将24只大鼠随机分为4组,盐水组(给大鼠灌生理盐水后采血),凉血消疕汤低、中、高剂量组(0.5g/ml、1g/ml、2g/ml),每组6只,体重200±20g,雌雄各半。5.药物血清对HacaT细胞增殖的影响采用MTT法,将HaCaT细胞以2×10~4的密度接种于96孔板,200μL/孔,24h细胞贴壁后弃去原培养液,加入含药培养基培养,每组均设3个复孔,培养24h,加入MTT液(20μL/孔),继续培养4h,小心吸弃孔内上清液,每孔加入150μLDMSO,振荡10min后,在酶标仪上测OD值,波长为492nm。6.药物血清对HaCaT细胞凋亡的影响取对数生长期细胞1瓶,稀释成1×104/mL细胞悬液。取100mL培养瓶,每瓶加入细胞悬液10mL(1×105个细胞/瓶),预培养24h。按实验分组加入含药培养基后,细胞继续培养24h。制备成细胞悬液,加入70%冷乙醇,离心去除固定液,加入3mLPBS洗两遍,加入1mLPI染色液,4℃冰箱避光孵育30min,500目铜网过滤。用流式细胞仪检测。7.统计学方法采用SPSS13.0统计软件包,数据均以均数±标准差((?)±S)表示,组间计数资料用t检验。结果:一.临床观察治疗组痊愈率为7.7%,显效率57.7%,有效率为27%,总有效率92.31%;对照组痊愈率为5%,显效率30%,有效率为40%,总有效率75%。经统计学分析有显著性差异(P＜0.05)。二.实验研究NTT实验:对照组分别与低浓度组、中浓度组、高浓度组、盐水组均有差别;高浓度组分别与低浓度组、中浓度组、盐水组、对照组均有差别;低浓度组与中浓度组比较没有差别;低浓度组与盐水组比较没有差别;中浓度组与盐水组比较没有差别;流式细胞实验:流式细胞仪(FCM)检测结果显示,细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性(P＜0.05)。结论:凉血消疕汤治疗寻常型银屑病临床疗效肯定,明显优于对照组。凉血消疕汤能明显地抑制HACAT增殖和促进HACAT凋亡,且呈浓度依赖性,与对照组比较差异有显著性。