亲水作用色谱是分离极性和亲水性化合物的重要色谱分离手段。本论文针对强极性化合物在反相高效液相色谱上保留弱甚至没有保留的问题,发展了硅胶基质的N-苄基氨基二乙酸和2-(N,N-二甲氨基)-1,3-丙二醇亲水作用色谱固定相。利用Cu(I)催化的末端炔烃与有机叠氮化合物的1,3-偶极环加成反应(CuAAC反应),将N-苄基氨基二乙酸和2-(N,N-二甲氨基)-1,3-丙二醇等具有强极性官能团的有机小分子分别键合到硅胶上,制备了含有N-苄基氨基二乙酸和2-(N,N-二甲氨基)-1,3-丙二醇为极性功能基团的亲水色谱固定相。在制备叠氮化合物关键中间体过程中,采用了一种高效、便宜易得的叠氮转移试剂(叠氮磺酰咪唑盐酸盐),在温和条件下将氨基原位转化为叠氮基。固定相的结构经过红外光谱和元素分析的确认,所有相关中间体的结构经过核磁、红外和质谱的验证。元素分析及红外光谱数据结果表明,N-苄基氨基二乙酸和2-(N,N-二甲氨基)-1,3-丙二醇小分子均成功键合到了硅胶基质表面,键合量分别是2.23μmol m-2和2.82μmolm-2。以核苷和碱基等极性化合物为探针化合物,在亲水模式下对N-苄基氨基二乙酸两性离子色谱柱进行了色谱评价,实验结果表明N-苄基氨基二乙酸两性离子固定相具有典型的亲水作用色谱保留特征,在亲水作用色谱中有着潜在的应用价值。与商品化的Atlantis和ZIC-HILIC色谱柱相比较,它在分离小分子酸、生物碱、核苷及碱基以及培南类抗生素时表现出更加优良的选择性,柱效也较高(鸟苷的理论塔板数高达44000plates m-1)。对此固定相的保留机理研究表明,它对这些化合物的保留机理除了亲水分配作用,还存在着其它相互作用,如氢键、离子交换、螯合和静电作用等。根据范氏方程,在流速约为0.35mL/min时,该色谱柱的柱效最高。此外N-苄基氨基二乙酸两性离子固定相在亲水色谱中的稳定性也较好,连续十五针进样,核苷及碱基类化合物的相对标准偏差均不超过0.5%。鉴于以上优点,使用该固定相成功分离了苯甘氨酸等8种氨基酸,与商品化亲水柱和赖氨酸柱子相比,N-苄基氨基二乙酸两性离子固定相显示了更优越的分离选择性和柱效,具有更加优良的亲水色谱性能。在优化的色谱条件下,可以用来分离三种维生素、抗菌类药物盐酸林可霉素和盐酸克林霉素及其衍生物。在对取代苯丝氨酸的分离分析时,可以将它们的非对映异构体实现基线分离。这些实际的色谱应用表明N-苄基氨基二乙酸两性离子固定相在医药等生命科学领域是一个有用的新型分离材料,具有广阔的应用前景。2-(N,N-二甲氨基)-1,3-丙二醇键合固定相在分离亲水性化合物时也显示了优良的亲水色谱性能,实验结果表明固定相的色谱保留机制可能存在多重作用。通过考察盐浓度和pH对化合物保留的影响,得出阴离子的保留行为受亲水作用／弱阴离子交换作用(HILIC/WAX)机制控制,而阳离子的保留主要是静电排斥-亲水作用(ERLIC)机制。基于以上固定相的色谱性质,成功分离了一些极性化合物,如核苷及碱基、生物碱、有机酸和抗生素。通过考察固定相的热力学性质,在测试的温度范围内观察到一个从流动相经过分析物传递到固定相的放热过程；并且保留机制并没有变化。另外,固定相显示了优良的重现性和稳定性。