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目的：探究晚期糖基化终末产物（Advanced Glycation End Products,AGEs）对人主动脉血管平滑肌细胞(Human Aorta Vascular Smooth Muscle Cells,HASMCs)钙化的影响，本实验主要通过体外实验方法验证 AGEs对于HASMCs钙化的影响，进一步探究其是否是通过PI3K/AKT GSK-3β信号通路激活wnt/β-catenin信号通路从而促进HASMCs的钙化。为血管钙化的预防和治疗提供新的策略。 方法：培养原代人主动脉血管平滑肌细胞，动态观察细胞形态并应用免疫荧光方法进行细胞鉴定；用不同浓度AGEs-BSA（0ug/ml、10ug/ml、20ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、200ug/ml）干预5天后提取细胞总蛋白，western blot方法检测钙化相关蛋白 OPG、BMP的表达量。冯库萨染色、茜素红染色检测各组钙化情况。应用 AKT特异性抑制剂 LY29400220mmol/L和 GSK-3β特异性抑制剂 TWS11910mmol/L处理HASMCs后加入40ug/ml的AGEs处理15min后提取细胞总蛋白，western blot方法检测P-AKT、AKT、P-GSK-3β、GSK-3β等蛋白的表达量。为了进一步验证PI3K/AKT信号通路及GSK-3β信号通路对于HASMCs钙化的影响，我们应用LY29400220mmol/L预处理HASMCs2小时，TWS11910mmol/L预处理HASMCs12小时后加入40ug/mlAGEs继续干预5天，提取细胞总蛋白，检测钙化相关蛋白OPG、BMP、β-catenin的表达量。为了进一步探究PI3K/AKT信号通路在AGEs引起的HASMCs钙化中的作用，我们应用AKT-siRNA转染HASMCs建立AKT基因沉默细胞模型，同时选用GSK-3β-RNAi慢病毒转染HASMCs建立GSK-3β基因沉默细胞模型，western blot检测AKT、GSK-3蛋白以验证转染是否成功及转染效率。待建立稳定的低表达AKT、GSK-3细胞模型后用40ug/ml的AGEs干预5天后提取细胞总蛋白，检测钙化相关蛋白的表达。 结果：1、AGEs能促进 HASMCs的钙化，且呈浓度依赖性，相比于对照组，AGEs组钙化相关蛋白的表达量明显升高（P<0.05），且在AGEs浓度为40ug/ml时作用最为明显；冯库萨染色和茜素红染色结果提示：AGEs+钙化培养组的钙化结节数量明显高于单纯钙化培养组；2、AGEs能促进HASMCs AKT、GSK-3β蛋白的磷酸化，相比于对照组，AGEs组P-AKT和P-GSK-3β蛋白的表达量明显升高（p<0.05）,且呈时间和浓度依赖性，在AGEs浓度为为25ug/ml，干预15min时，其磷酸化水平最高，这也将作为我们下一步实验最佳干预浓度和时间,但是AKT、GSK-3β的表达量无明显变化（p>0.05）；3、AGEs+LY294002组P-AKT及P-GSK-3β蛋白的表达量相比于AGEs组明显下降（p<0.05），但总的AKT及GSK-3β的表达量无明显变化（p>0.05）；AGEs+LY294002组钙化相关蛋白的表达量相较于 AGEs组明显下降（p<0.05)；4、在应用AKT-siRNA转染HASMCs后，si-RNA转染组AKT蛋白的表达量与对照组相比明显降低（p<0.05），而在加入AGEs干预后， AKT-siRNA转染组钙化相关蛋白OPG、BMP的表达量明显低于单纯AGEs干预组（p<0.05）；5、HASMCs转染GSK-3β-RNAi慢病毒3天后用荧光显微镜能观察到细胞内稳定表达的绿色荧光，western blot检测GSK-3β蛋白表达量，与对照组相比，GSK-3β-RNAi慢病毒转染组GSK-3β蛋白表达量明显降低（p<0.01）,在用 AGEs干预后，相比于单纯 AGEs干预组， GSK-3β-RNAi慢病毒转染组钙化相关蛋白的表达量明显增加(p<0.05)。 结论：1、AGEs能促进HASMCs的钙化；2、AGEs能激活PIK3/AKT信号通路，而活化的AKT能抑制下游GSK-3β的活性；3、PI3K/AKT GSK-3β信号通路可能在AGEs引起的HASMCs钙化中起着重要作用。