免疫亲和柱再生及其在中药中赭曲霉毒素和黄曲霉毒素检测时的重复使用研究

来源 :锦州医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:iqwanifir
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目的传统中药材由于储存不当等原因极易污染各种真菌毒素,真菌毒素的毒性强,会对人和家畜的健康造成极大的威胁。免疫亲和柱作为毒素净化的手段之一因其具有较高的特异性和灵敏度等优点近年来被广泛应用。但是免疫亲和柱的成本较高,一般只能使用一次,一旦操作失误将导致极大的浪费,也不利于大规模毒素检测的开展。因此研究免疫亲和柱的再生和重复使用以降低检测成本、提高检测效率将是大势所趋。本研究以“药食同源”中药-麦芽、干姜和甘草为研究对象,通过对这些中药材进行加标处理,利用免疫亲和柱进行净化,以加标回收率作为指标来考察华安麦科赭曲霉毒素免疫亲和柱和黄曲霉毒素免疫亲和柱的再生性能,通过实验筛选出免疫亲和柱可重复使用次数最多时的相关条件,以求最大程度的节约中药毒素净化时的实验成本,有利于中药中毒素检测的开展,符合节约、高效、环保的时代理念。方法建立灵敏准确的适合麦芽、干姜和甘草中赭曲霉毒素和黄曲霉毒素快速检测和高效液相色谱串联荧光检测器(HPLC-FLD)的方法,以毒素加标回收率为指标考察不同的中药材基质、样品前处理方法、样品溶液pH值及其他外部因素对免疫亲和柱再生和重复使用的影响,最终筛选出赭曲霉毒素和黄曲霉毒素免疫亲和柱重复使用次数最多时的相关条件。结果由实验结果可知,赭曲霉毒素和黄曲霉毒素免疫亲和柱均可被再生并重复使用,使用次数受样品基质、样品前处理方法、样品溶液pH值等因素的影响。通过再生,对于加标的生麦芽或干姜样品,赭曲霉毒素免疫亲和柱最多可使用8次或3次且保证回收率超过70%。当以水为稀释剂的改良法进行样品前处理和样品溶液pH值调节至7-8时,赭曲霉毒素免疫亲和柱再生次数将显著增加。黄曲霉毒素四合一免疫亲和柱再生次数会根据具体毒素的不同而有所不同,使用华安麦科公司推荐的样品前处理方法时黄曲霉毒素免疫亲和柱再生性最好,以甘草和生麦芽为基质时免疫亲和柱可使用9次且黄曲霉毒素AFB2和AFG2的回收率保持合格水平。此外对于免疫亲和柱而言,PBS可作为一个良好的填充溶液用于柱子的再生和再利用。结论通过毒素的加标回收实验成功的筛选出免疫亲和柱再生性最好时的各种相关条件,证明了赭曲霉毒素和黄曲霉毒素免疫亲和柱可以被再生和重复利用,可为减少实验成本,进行大规模毒素净化实验提供思路和参考。
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