【摘 要】
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该文分离纯化了WSSV,在毕赤酵母表达系统中克隆并表达了vp28基因,并对表达的重组VP28蛋白在阻止WSSV经口感染方面进行了初步的研究.首先,以典型患白斑综合症的濒死斑节对虾为
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该文分离纯化了WSSV,在毕赤酵母表达系统中克隆并表达了vp28基因,并对表达的重组VP28蛋白在阻止WSSV经口感染方面进行了初步的研究.首先,以典型患白斑综合症的濒死斑节对虾为材料,取其鳃和胃,经冰浴匀浆和冷冻高速离心,得到大量有较高纯度的完整WSSV核衣壳,负染后电镜观察,纯化的WSSV核衣壳呈杆状,大小约380×80nm,核衣壳上,垂直于纵轴,有多道横纹.以纯化的WSSV核衣壳裂解液为模板,用PCR的方法扩增出vp28基因,然后将该基因克隆到质粒pPICZ<,α>A上,形成重组质粒pPICZ-vp28,在大肠杆菌Top10菌株中大量扩增pPICZ-vp28,分离并纯化该质粒,将纯化的pPICZ-vp28用限制性内切酶线性化后,用电穿孔法将线性化的pPICZ-vp28导入毕赤酵母X33菌株中,获得转化子X33-1.用甲醇诱导X33-1表达vp28基因.SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,X33-1能表达出具免疫反应活性的重组VP28蛋白.
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