论文部分内容阅读
布渣叶(Microcos paniculata)是药食两用植物,可用作传统中药复方和中草药凉茶的主要原料之一。在报道的布渣叶所含化学成分中,黄酮类成分是布渣叶的主要药理活性成分,其中,布渣叶的芹菜素碳苷(apigenin C-glycosides,ACGs)种类较多且含量较大,可作为布渣叶的活性部位加以研究。目前,尚未有相关报道对布渣叶ACGs进行定量分析及药效机制研究。本研究旨在将布渣叶ACGs进行提取分离及定性定量分析,以布渣叶ACGs作为活性部位,探究其对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的干预作用,继而运用代谢组学手段揭示其可能的分子机制。具体实验内容及结果如下:(1)对布渣叶ACGs部位采用柱层析结合半制备型高效液相色谱的方法进行提取分离,用液相色谱-质谱联用技术对分离得到的布渣叶ACGs进行定性分析,与对照品的色谱及质谱数据进行比较,一共鉴定了7种芹菜素碳苷:维采宁-2、异夏佛塔苷、夏佛塔苷、维采宁-1、牡荆苷、异牡荆苷以及异佛莱心苷。利用HPLC对布渣叶ACGs的7种芹菜素碳苷进行了定量分析,结果表明布渣叶ACGs所含的7种芹菜素碳苷约占ACGs的60.83%,为ACGs的主要成分。(2)采用小鼠热板法模型、二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型、醋酸致小鼠扭体模型等经典模型快速便捷地对布渣叶ACGs的镇痛抗炎作用进行综合评价,结果表明布渣叶ACGs不能延长小鼠的热阈值,不具有中枢性镇痛的药效,但能够显著性地抑制醋酸所致的小鼠扭体以及二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀,表明布渣叶ACGs(10-40 mg/kg)具有显著的外周镇痛及抗急性非特异性炎症的效果。(3)建立LPS诱导的小鼠ALI模型,通过肺组织形态学观察,测定预示肺微血管通透性增加及肺部炎症的常见指标,如肺干湿重比、中性粒细胞数量、促炎性细胞因子的含量等,结果表明布渣叶ACGs能够显著地抑制LPS引起的小鼠肺微血管通透性的增加以及肺部炎症反应,对LPS诱导的小鼠ALI具有明显的干预作用。此外,不同剂量的布渣叶ACGs干预LPS诱导的小鼠ALI的药效强度有所不同,大体上呈现出一定的药物剂量依赖性。(4)在药效学研究的基础上,利用气相色谱-质谱联用法对对照组、LPS组及布渣叶ACGs(40 mg/kg)小鼠的血清进行了代谢组学分析。根据多元统计分析的结果,综合筛选得到了LPS组和ACGs小鼠血清之间的30个差异代谢物,并将其导入Ingenuity Pathway Analysis(IPA)数据库进行分子网络通路分析。结果表明布渣叶ACGs(40 mg/kg)对LPS诱导小鼠ALI的干预作用可能与抑制丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPKs)信号转导通路及线粒体凋亡通路有关。(5)通过western blot技术检测对照组、LPS组及布渣叶ACGs(40 mg/kg)小鼠肺脏中MAPKs信号转导通路以及线粒体凋亡通路上的关键性蛋白分子,结果表明布渣叶ACGs(40 mg/kg)能够显著性地抑制LPS激活的TLR4受体以及ERK和JNK分子的磷酸化,表明布渣叶ACGs(40 mg/kg)能够通过抑制TLR4-MAPKs信号转导通路,缓解了LPS引起的肺部炎症反应,从而干预了LPS诱导的小鼠ALI。另一方面,布渣叶ACGs(40 mg/kg)能够显著性降低Bax以及cl-caspase-3的含量,同时升高Bcl-2的含量,表明布渣叶ACGs(40 mg/kg)能够通过抑制线粒体凋亡通路,减少了LPS引起的肺细胞凋亡,从而干预了LPS诱导的小鼠ALI。综上所述,本研究对布渣叶ACGs中60.83%的主要成分进行了鉴定,在建立LPS诱导的小鼠ALI模型的基础上,探讨并验证了布渣叶ACGs对LPS诱导的小鼠ALI的干预作用及其核心抗炎机制,不仅为ALI的治疗及药物开发提供参考,也为布渣叶ACGs的医药应用及开发奠定基础。