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【目的】 从淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中扩增出糖原分支酶基因(NYD—GBE)的全长序列，验证其在抗性品系和敏感品系中的表达差异，并构建NYD—GBE原核和昆虫表达载体，通过细胞转染鉴定其与抗药性相关的关系。 【方法】 根据抑制性差减杂交和基因芯片筛选获得的抗性相关糖原分支酶cDNA片段，设计引物，运用多种快速扩增cDNA末端法(Rapid amplification of cDNA ends RACE)从淡色库蚊抗性品系中扩增出基因的5’和3’末端，然后通过T／A克隆插入pGEM-T Easy质粒载体，经过测序、对位拼接获取全长序列。用BlastX软件将该基因推导的氨基酸序列与蛋白质公共数据库Swissprot分析，用ClustalW软件作聚类分析，用EMBL pI／Mw tool计算等电点和分子量，Signal3.0软件进行信号肽分析，ProtScale软件进行疏水性分析，PSORT Ⅱ软件进行细胞定位分析，PatSearch软件进行基序分析，SMART软件进行蛋白质结构域分析。通过实时荧光定量PCR(Real time PCR)技术验证在抗性品系和敏感品系中的表达差异，并用基因重组方法构建NYD-GBE原核和昆虫表达载体；将昆虫表达载体转入蚊细胞，经筛选获得稳定转染的细胞系，RT-PCR鉴定目的基因的稳定表达，并用~3H TdR掺入法检测稳定表达的细胞对溴氰菊酯的敏感性。 【结果】 获得淡色库蚊NYD—GBE基因全长cDNA序列，总长度为2337bp，开放阅读框为2070bp，编码689个氨基酸(GenBank／NCBI DQ102393，2005)，荧光定量PCR结果显示，NYD-GBE在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中的表达量是敏感品系的19.67倍。全长基因推导出的氨基酸序列与公共数据库比对，发现与冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)和拟暗果蝇(Melanogaster pseudoobscura)的一个未知功能蛋白分别具有82％和72％同源性。蛋白质的理论分子量为79811.25Ku，等电点为6.11。成功构建NYD—GBE原核和昆虫表达载体。~3H掺入法结果显示转染NYD—GBE目的基因细胞组的存活率与对照转染无关基因CAT细胞组无显著性差异(p＞0.05)。 【结论】 NYD-GBE基因在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中高表达，提示NYD-GBE基因与淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关，但其在细胞对抗溴氰菊酯的毒性作用中未发现有保护作用。