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本研究通过实验建立了一个高频率的芸芥体细胞胚胎发生及植株再生体系,并在此基础上,研究了各种因素对芸芥体细胞胚胎发生、成熟和萌发的影响,优化了各种条件组合;探讨了芸芥体细胞胚胎发生的途径与起源;对芸芥体胚发生过程中基因在转录水平和翻译水平的差异表达进行了初步研究;建立了一个发根农杆菌R1000介导的芸芥高效遗传转化体系。主要研究结果如下:
本研究以不同基因型芸芥为供试材料,研究了基因型、培养基成份、外植体种类及大小、PGRs的种类与浓度、外植体取材时间、低温预处理等因素对芸芥体细胞胚胎发生率的影响。通过细胞学方法对芸芥体细胞胚胎的起源及发生部位进行了研究。建立了芸芥胚性培养物的mRNA差别显示技术体系,利用此技术对芸芥体胚发生早期的mRNA差异表达进行了分析,初步获得了18条cDNA差异片段。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对芸芥体胚发生过程中可溶性蛋白质的动态变化进行了分析,并找到了一些与芸芥体胚发生相关的特异性蛋白。建立了芸芥体胚发生早期蛋白质的双向电泳技术体系。本研究对芸芥体细胞胚胎发生早期的蛋白质进行了双向电泳分析,经银染后,获得了清晰而稳定的图谱。通过对发根农杆菌遗传转化主要影响因素的研究,首次建立了农杆菌R1000介导的转化体系。